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雙抗夾心法ELISA實驗操作步驟
閱讀：2151 發布時間：2019-7-18上海恒遠生物科技有限公司由資深專家帶頭組建研發團隊，十幾年ELISA試劑盒開發經驗，品質保障，值得信賴；BIM品牌試劑盒更是度高，已被國內重點實驗室廣泛使用，如北京生命科學研究所，中國科學院，協和醫科大學等；諸多刊物的文章廣泛引用，如Nature, PNAS, Cell Research, Biomaterials等，目前SCI文章及國內核心期刊引用已達數百篇。專業技術團隊提供完備的售前及售后服務，確保您實驗成功!我司來教您做實驗有哪些步驟？
操作步驟：
1.|標準品的稀釋與加樣：在酶標包被板上設標準品孔10孔，在第yi、第二孔中分別加標準品100μl，然后在第yi、第二孔中加標準品稀釋液50μl，混勻；然后從第yi孔、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉，再各取50μl分別加到第五、第六孔中，再在第五、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul，混勻；混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl，混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。（稀釋后各孔加樣量都為50μl，濃度分別為24μg/L ，16μg/L， 8μg/L，4μg/L， 2μg/L）。
2.加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。
3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4.配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
7.溫育：操作同3。
8.洗滌：操作同5。
9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。
11.測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
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