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血清知多少

2023-5-16  閱讀(2054)

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血清是由血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物,其組成成份雖大部分已知,但是由于血清成分十分復雜,直至今天,血清中的所有成分仍未wan全分析出來,且血清組成及含量常隨供血動物的性別、年齡、生理條件和營養(yǎng)條件不同而發(fā)生改變。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機物等,這些物質(zhì)對促進細胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。

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牛血清的區(qū)別

牛血清是細胞培養(yǎng)中重要的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細胞生長必須的營養(yǎng)成份,常用于動物細胞的體外培養(yǎng)。可以劃分為:胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、成牛血清。

? 胎牛血清(Foetal Bovine Serum,簡稱FBS:胎牛血清是指懷孕3-8個月的母牛被屠宰后,發(fā)育未wan全的胎牛心臟密閉穿刺采血后,通過一系列工藝處理最終獲得。此時胎牛血中含有特殊的生長發(fā)育因子,一旦胚胎發(fā)育wan全這些因子會自動消失。


? 新生牛血清(Newborn Calf Serum,簡稱NBCS:出生14小時內(nèi)未進食的新生牛,通常采用頸動脈采集血液分離得到的血清。

?小牛血清(Calf serum, CS)取自出生后3天至6個月的健康小牛,動脈采血分離血清;

?成牛血清Adult Bovine Serum,簡稱ABS:取自健康的成年牛,收全血后分離得到血清

胎牛血清是品質(zhì)相對較高的,因為胎牛還未接觸外界,血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分最少。

某些細胞必需胎牛血清才能生長,而有些細胞只需小牛血清即可。使用濃度一般在5%-10%,有特殊要求的濃度在20%

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牛血清的保存

未拆封的牛血清,一般情況下應(yīng)存放于-10℃至-20℃,在產(chǎn)品規(guī)定的效期內(nèi)均可使用,若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至合適大小的無菌離心管內(nèi),再放回冷凍。

牛血清在放入冷凍環(huán)境前,建議瓶中預(yù)留一定的體積空間,避免血清凍結(jié)后體積增大,撐破包裝瓶,形成污染。

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牛血清的使用

血清從冷凍冰箱取出后,先置于28℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融,或通過水浴鍋促使其溶解。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。wan全溶解后建議盡快使用,若長時間儲存在2-8℃,血清中的各種(脂)蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能因凝集而形成沉淀或可見的混濁。

牛血清的沉淀處理

血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。若欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。

解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(-20℃至37),實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。請勿將血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。

血清中的黑膠蟲"

在細胞培養(yǎng)的時候,有時會在400倍顯微鏡下看到小黑點在動,小黑點有時呈點狀,有時呈小的片狀,運動形式為在原地振動,類似布朗運動,這種小黑點既不是細菌、霉菌,也不是支原體,目前業(yè)內(nèi)人士稱其為黑膠蟲"

黑膠蟲究竟是一種生物還是非生物,本身就存在爭議。黑膠蟲一般是存在血清里的,而血清通常是經(jīng)過0.1μm濾膜過濾的,所以血清里不可能存在細菌、霉菌及支原體等微生物。如果說黑膠蟲不是生物,它會不斷增多,達到一定數(shù)量時會與細胞競爭性生長,與細胞競爭培養(yǎng)基中的營養(yǎng),從而使得細胞營養(yǎng)不足而死亡。

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