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蜂王漿中10-羥基-2-葵烯酸液相色譜分析

閱讀:2611        發布時間:2011-7-12

                蜂王漿中10-羥基-2-葵烯酸液相色譜分析

10-羥基-2-葵烯酸是科學家從蜂王漿中分離出一種有機酸,其分子式為C10H18O3,稱為10-羥基-2-癸烯酸(簡稱HAD),是蜂王漿的重要成分之一,是一種特殊的不飽和有機酸,由于這種酸在自然界的其它物質中沒有,只存在于蜂王漿中,所以也稱為王漿酸。10-羥基-2-癸烯酸含量是蜂王漿質量的重要指標之一,一般含量在1.4%~4%之間,約占總脂肪酸的50%以上。分離出的純王漿酸呈白色晶體,在新鮮的蜂王漿中多以游離形式存在,性質比較穩定,有很好的殺菌、抑菌作用和抗癌、抗放射的功能。10-羥基-2-癸烯酸大大提高了蜂王漿的保健和醫療的效用。
一、試劑
1.本實驗所用水為重蒸餾水;
2.甲醇:分析醇
3.乙醇:優級純
4.內標物:對羥基苯甲酸甲酯含量99.0%;
5.10-HAD標準品:99.0%以上。使用前應在放有濃硫酸的減壓干燥器內減壓干燥24h;
6.10-HAD標準溶液:取干燥后的10-HAD標準品約25mg,精密稱定,加無水乙醇溶解并移入1000ml容量瓶中,用無水乙醇稀釋至刻度,搖勻。此溶液每毫升含內標物約0.65mg。
7.鹽酸(C=0.03mol/L):量取0.1mol/L鹽酸100ml,加入200ml重蒸餾水中。
8.流動相:甲醇55%+0.03mol/L鹽酸10%+水35%
二、儀器配置:
LC-3000液相色譜儀:配紫外檢測器,泵頭帶沖洗功能;
色譜處理工作軟件:能通過電腦鍵盤輸入LC-3000液相色譜儀所有參數,并能對柱溫箱參數設定;
色譜柱:C18,250*4.6*10 或250*4.6*5
柱溫箱;
離心機:不低于3000r/min,50ml
超聲波清洗機;
漩渦混合器;
分析天平:精度0.0001g
三、樣品處理
樣品解凍至室溫后用玻璃棒攪勻,取約0.5g,置于已稱定的50ml容量瓶中,精密稱定,加0.03mol/L鹽酸1ml和水2ml,置漩渦混合器上混合使樣品溶解,加無水乙醇30ml,邊加邊輕輕搖動,再精密加入內標溶液10ml,并用無水乙醇稀釋至刻度,搖勻,立即置超聲波中超聲15min,或置漩渦混合器上振蕩15min,取出,在3000r/min下離心10min后測定。如不能及時測定,應放置在冰箱中冷藏待測。
四、色譜條件
測定波長:210nm;柱溫:35度;流動相流速:1ml/min。
五、校正因子測定
精密吸取10-HAD標準溶液0.5、1、2、3、4、5ml至10ml容量瓶中。精密加入內標溶液2ml,用無水乙醇稀釋至刻度,搖勻。分別吸取此溶液2ul,注入色譜儀,用峰面積比值計算,應呈線性,求出校正因子F。
:平行試驗相對偏差不得超過2.0%
六、樣品測定
吸取樣品溶液4ul,注入色譜儀,按“內標法”定量。
七、計算
蜂王漿中10-羥基-2-葵烯酸含量按式中計算:
 
式中:
                  Ai   Ms
X2=F×----×----×100
                    As   Mi
 
X2---蜂王漿中10-羥基-2-葵烯酸含量%
F----校正因子
Ai---樣品中被測組分峰面積
As—試樣中內標物峰面積
Ms—內標物質量,單位為克(g)
Mi—樣品質量,單位為克(g)
 
 

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