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多酚氧化酶檢測試劑盒(PPO)說明書

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多酚氧化酶檢測試劑盒(PPO)說明書

可見分光光度法

貨號:YJS2203                                       規格:50管/24樣

產品簡介:

PPO主要存在于動物、植物、微生物和培養細胞中,是一種含銅的氧化酶,能使一元酚和二元酚氧化產生醌,從而引起褐化,與果蔬加工、茶葉品質和組培等密切相關。

PPO能夠催化鄰苯二酚產生醌,后者在525nm有特征光吸收。

試驗中所需的儀器和試劑:

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1ml玻璃比色皿、研缽、冰蒸餾水

產品內容:

提取液:液體60ml×1瓶,4保存;

試劑一:液體40ml×1瓶,4保存;

試劑二:液體10ml×1瓶,4保存;

試劑三:液體20ml×1瓶,4保存

操作步驟:

  • 粗酶液提取:   

1、收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照每200萬細菌或細胞加入400μl提取液,超聲波破碎細菌或細胞(功率20%,超聲3秒,間隔10秒,重復30次)8000g 4離心10分鐘,取上清,置冰上待測。

2、稱取約0.2g組織,加入1ml提取液進行冰浴勻漿。8000g 4離心10分鐘,取上清,置冰上待測。

二、測定操作表:

試劑名稱(μl

測定管

對照管

試劑一

600

600

試劑二

150

150

樣本

150

 

煮沸的樣本

 

150

37(哺乳動物)25(其它物種)中準確水浴10min后,迅速放入冰浴中冷卻

試劑三

300

300

充分混勻,5000g,常溫離心10min,收集上清,用蒸餾水調零,525nm處檢測測定管和對照管吸光度。

注意:每個測定管需要設置一個對照管,可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進行1min沸水浴處理

PPO計算:

1、血清、血漿或果汁PPO活性計算

單位定義:每分鐘每毫升樣品在每毫升反應體系中使525nm吸光值變化0.01為一個酶活力單位

PPO(U/mL=(A測定-A對照)×反應總體積÷(V液*×V樣*÷V樣總*) ÷0.01÷反應時間

=80×(A測定-A對照)÷V液*

2、組織中PPO活力的計算

(1)按樣本蛋白濃度計算:

單位的定義:每分鐘每mg組織蛋白在每毫升反應體系中使525nm處吸光值變化0.01定義為一個酶活力單位。

PPO(U/mg prot)=反應總體積(1200μl)÷樣本體積(150μl)÷反應時間(10min)÷0.0(A測定-A對照)÷蛋白濃度(mg/ml)=80×(A測定-A對照)÷蛋白濃度(mg/ml

(2)按樣本鮮重計算:

單位的定義:每分鐘每g組織蛋白在每毫升反應體系中使525nm處吸光值變化0.01定義為一個酶活力單位。

PPO(U/g 鮮重)=反應總體積(1200μl)÷樣本體積(150μl)÷反應時間(10min)÷0.0(A測定-A對照)÷樣本鮮重(g/ml=80×(A測定-A對照)÷樣本鮮重(g/ml

3按細菌或細胞密度計算:

單位的定義:每分鐘每1萬個細菌或細胞在每毫升反應體系中使525nm處吸光值變化0.01定義為一個酶活力單位。

PPO(U/104 cell)=反應總體積(1200μl)÷樣本體積(150μl)÷反應時間(10min)÷0.0(A測定-A對照)÷細菌或細胞密度(104/ml=80×(A測定-A對照)÷500*

 

*V液:加入的血清、血漿或果汁的體積

*V樣:加入樣本體積

*V樣總:加入提取液體積

*500:細菌或細胞總數500萬

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