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ELISA中陰性本底的形成原因和消除方法

時間:2011/8/16閱讀:2784
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ELISA中陰性本底的形成原因和消除方法

在酶聯固相免疫實驗中,尤其在間接ELISA法中,經常會碰到陰性本底的問題。主要是本底過高和不同標本的本底值差異較大。本底或稱背景,是ELISA中的非特異性顯色。底物未經過酶作用而呈現的顏色稱為空白。底物液如配制不當會出現一定的空白值。這個空白值只要不太高(A0.05),可從各測定值中減除,并不影響實驗結果。這里討論的是不含待測抗原或抗體的陰性標本在ELISA中出現的本底。從理論上來說,只有陰性標本zui終才能引起顯色反應,那么,為什么會出現本底呢?

  固相載體的吸附:在酶免疫測定中,ELISA的特點是利用分離游離和結合的酶結合物的手段。固相載體與吸附在其上的抗原或抗體形成固相抗原或固相抗體,即免疫吸附劑(Immu-nosorbent)。通常所用的固相載體聚苯乙烯其表面主要是疏水基團,通過疏水鍵與蛋白質結合。這種物理性吸附是非特異性的,雖然蛋白質的分子量、等電點、濃度等對吸附的量有一定的影響,但總的來說各種蛋白質均能吸附在聚苯乙烯載體的表面。因此除在包被時有目的地使抗原或抗體吸附在載體上外,在ELISA各個步驟中均有可能發生干擾物質的吸附,使zui終產生與受檢抗原-抗體反應無關的顯色,這是形成本底的主要原因。

 

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