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上海研謹(jǐn)生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第15年

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Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒說(shuō)明書(shū)

時(shí)間:2020/6/19閱讀:2341
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Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒說(shuō)明書(shū)

 

Tricine-SDS-PAGE Gel Kit

Tricine-SDS-PAGE凝膠制備試劑盒

 

目錄號(hào):K2384

 

 

組分說(shuō)明及保存條件

 

                Cat. No.          YJ2384

                                                保存條件

                Size             約 50塊膠

                49.5%T 3%C         30 ml         2-8ºC

                49.5%T 6%C         100 ml        2-8ºC

                凝膠緩沖液              140 ml        2-8ºC

                甘油                 30 ml          室溫

                APS                 0.5 g         室溫

                TEMED              750 ul      室溫,避光

 

         本產(chǎn)品所提供的 APS(過(guò)硫酸銨)為固體粉末,使用前加入雙蒸水溶

         解即配制成10%APS溶液(0.5 g  APS加5 ml雙蒸水),將溶液分裝后

         置于-20℃保存,通常半年內(nèi)有效。溶液在使用中可放置4℃保存兩周。

 

 

             本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途  

 

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

  常規(guī)的Tris-SDS-PAGE電泳的只能分辨大分子蛋白,對(duì)于相對(duì)分子量小的,尤其

是10 kD以下的蛋白分辨率極低。而Tricine-SDS-PAGE可以很好的分離分子量在1-10 kD

的蛋白及多肽,成為目前電泳法變性分離多肽的主要方法。本產(chǎn)品包括Tricine-SDS-

PAGE凝膠制備所需全套試劑,只需自備蒸餾水,即可制備高質(zhì)量各種濃度的凝膠,方

便、快捷,電泳后可直接用于考染、銀染、Western雜交等實(shí)驗(yàn)。

 

注意事項(xiàng)

 

1.  10%APS配制后分裝-20度保存。APS溶液不穩(wěn)定,應(yīng)盡量減少室溫存放時(shí)間,每

   次取用后立即放回冰箱,以防失效;若發(fā)現(xiàn)凝膠聚合時(shí)間延長(zhǎng),應(yīng)考慮更換,使用

   -20度保存的10%APS。

2.在凝膠配制過(guò)程中,尤其是液體混勻步驟,應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生。

3.在分離膠上層加蒸餾水時(shí)要小心操作,加水時(shí)速度不能太快。

4.丙烯酰胺具有神經(jīng)毒性,操作時(shí)請(qǐng)穿著實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套。

5.本產(chǎn)品僅用于科研,不能用于人體實(shí)驗(yàn)或人體治療。

 

操作步驟

 

根據(jù)目的蛋白分子量大小選擇合適的PAGE分離膠配制濃度,凝膠濃度配方參考附表。

 I 配制分離膠

1.將不同體積的雙蒸水、49.5%T 6%C、凝膠緩沖液和甘油加入到離心管中混合。

2.加入10%APS和TEMED,立即渦旋混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

3.在凝膠模具中迅速灌入適量分離膠溶液(1 mm mini-gel,分離膠溶液加約4 ml),

   然后在分離膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3  cm的水層,使凝膠表面保持平整。

4.靜置,待分離膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。

 

 II 配制夾層膠

  去除覆蓋在分離膠上的水層,用濾紙將殘留的水盡量吸去。

1.將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。

2.加入10%過(guò)硫酸銨和TEMED,立即渦旋混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

3.將適量的夾層膠溶液迅速加至分離膠的上面(對(duì)于1 mm的mini-gel,夾層膠溶液加

   約1 ml ),然后在夾層膠溶液上輕輕覆蓋一層水層,使凝膠表面保持平整。

4.靜置,待夾層膠和水層之間出現(xiàn)一個(gè)清晰的界面表示凝膠已聚合。

 

     III 配制濃縮膠

       去除覆蓋在夾層膠上的水層,用濾紙將殘留的水吸去。

    1.將不同體積的雙蒸水、49.5%T 3%C和凝膠緩沖液加入到離心管中混合。

    2.加入10%過(guò)硫酸銨和TEMED,立即渦旋混勻5-10秒,以使溶液充分混勻。

    3.將梳子插入凝膠內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。

    4.待凝膠聚合后,小心地拔出梳子,以免破壞加樣孔。

    5.進(jìn)行電泳操作。

 

     IV 電泳

      將電泳槽放入4℃或冰水浴中,外槽加入陽(yáng)極緩沖液(YJ2388),內(nèi)槽加入陰極緩

    沖液(YJ2387),30V預(yù)電泳10 min,將樣品(已經(jīng)過(guò)Tricine上樣緩沖液YJ2385

    處理)加入點(diǎn)樣孔后30V電泳1小時(shí),100V電泳至溴酚藍(lán)到達(dá)膠底部后停止電泳,進(jìn)行后續(xù)的考馬斯亮藍(lán)染色或電轉(zhuǎn)。

 

實(shí)驗(yàn)代做服務(wù):

ELISA試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)

CCK8檢測(cè)

基因組DNA提取

 

蛋白相互作用分析

Western Blot

免疫組化

熒光定量PCR

動(dòng)物模型服務(wù)

流式細(xì)胞檢測(cè)

ROS氧化分析

激光共聚焦

DNA甲基化實(shí)驗(yàn)

細(xì)胞劃痕

鈣離子濃度檢測(cè)

掃描電鏡實(shí)驗(yàn)

microRNA測(cè)序

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

探針合成

ATP/ADP檢測(cè)

石蠟/冰凍切片

定點(diǎn)突變

線粒體膜電位(MMP)檢測(cè)

細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的測(cè)定

藥理毒理動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

 

免疫共沉淀

真核表達(dá)載體構(gòu)建

染色質(zhì)免疫沉淀CHIP

非標(biāo)定量(Label-free)實(shí)驗(yàn)

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