（懸浮細(xì)胞比較依賴細(xì)胞密度，細(xì)胞傳代前及傳代后密度不宜過低，過低可能會導(dǎo)致細(xì)胞生長緩慢或者死亡。細(xì)胞傳代前培養(yǎng)基不能*變黃，不然細(xì)胞狀態(tài)變差會導(dǎo)致傳代失敗。傳代過程吹打細(xì)胞應(yīng)盡量輕柔，不應(yīng)吹出過多氣泡。）

將細(xì)胞放回37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)。

傳代比例: 不同細(xì)胞生長速度不一，具體傳代比例視細(xì)胞生長速度而定，大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代，生長較慢的細(xì)胞可以1:2傳代。

Cell cryopreservation

凍存液：92%*培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇）
降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過夜后液氮保存。

Tips：

細(xì)胞經(jīng)過運(yùn)輸后，部分細(xì)胞由于溫度變化及劇烈碰撞后死亡破碎形成碎片，是正常現(xiàn)象。貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。加5ml PBS重懸細(xì)胞，再900-1000rpm(約150g)離心3min，用新鮮的*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)瓶。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。
細(xì)胞生長不均時，可以將細(xì)胞消化吹散后加入新的培養(yǎng)基重新接種或傳代。
細(xì)胞生長緩慢時，可以選擇提高血清濃度培養(yǎng)（高不超過20%），也可以根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)，選擇傳代細(xì)胞到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)。
不同細(xì)胞貼壁性差異比較大，所以消化時間差別較大，20s-10min均有可能，具體以細(xì)胞消化到相互分離但未脫落，并可以輕輕吹下為準(zhǔn)，嚴(yán)禁消化到細(xì)胞*漂浮。客戶消化過度導(dǎo)致細(xì)胞死亡、漂浮、生長緩慢，不提供免費(fèi)售后服務(wù)。
干冰發(fā)貨均為兩支，客戶先復(fù)蘇一支，若復(fù)蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。若客戶同時復(fù)蘇兩支均狀態(tài)不佳，我方不提供免費(fèi)售后服務(wù)。
細(xì)胞狀態(tài)正常時，應(yīng)盡快凍存細(xì)胞保種，凍存后應(yīng)隨機(jī)抽取一支檢測凍存效果。我方不對客戶凍存細(xì)胞導(dǎo)致死亡負(fù)責(zé)，客戶凍存細(xì)胞死亡不提供免費(fèi)售后服務(wù)。

Notice：

客戶收到細(xì)胞有任何疑問請及時致電我們，細(xì)胞收到后1周內(nèi)沒有任何電話，或其他形式回訪，默認(rèn)為細(xì)胞質(zhì)量沒問題，之后出了任何問題不給予免費(fèi)售后。細(xì)胞免費(fèi)售后只提供一次，若重發(fā)后再次培養(yǎng)死亡不再免費(fèi)補(bǔ)發(fā)，細(xì)胞收貨時已經(jīng)死亡或密度不足的除外。

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