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我公司對ELISA實驗洗滌次數做出的心得點評

閱讀:942          發布時間:2016-2-25

    您知道嗎?在ELISA實驗操作中,洗滌是一大重點步驟。這*程主要作用是可降低未結合抗體所引起的背景信號,從而增加分析的信噪比。每一步之間的洗滌確保只有特異的結合事件被保留,在zui后一步產生信號。但是,不充分的洗滌會導致差異和高背景,從而帶來不理想的結果。那么在ELISA洗滌步驟中需要怎樣正確操作呢?需要洗滌幾次?
    據上海恒遠生物科技有限公司技術專員介紹:ELISA通常在96孔板中開展,其上包被了結合抗原或抗體。在封閉步驟后,包被后的平板首先與一抗或抗原孵育。隨后通過一些洗滌步驟去除未結合(低親和力)的抗原-抗體復合物。接著,平板與二抗孵育。這種帶有酶的抗體與高親和力的抗原-抗體復合物結合。之后,又是一輪洗滌。zui后是添加底物并檢測信號。
    洗滌次數越多,背景越低。然而,太多次的洗滌會降低信號強度,使其難以測定。通常的做法是在每次抗體或抗原孵育后重復洗滌三次。不過,ELISA板的商會對洗滌次數提出建議。一般而言,商包被平板需要的洗滌次數比用戶包被的平板要少。對于用戶包被的ELISA板,必須優化洗滌次數。
    控制洗滌量和洗滌次數的另一種方法是加入過量的洗滌液。一般來說,96孔板的每個孔能容納330至460 μl。不過,有些自動化洗板機可設置程序,分配遠遠超出這個量的洗滌液,比如1ml。它是如何做到的呢?其實很簡單,就是在分液的同時打開吸液功能。換句話說,隨著分液器分配更多的液體,抽吸器也將液體吸出。這種技術能增加洗滌量,但不會溢出到其他孔中。
    相信在您的悉心優化下,很快就能做出漂亮的ELISA實驗結果。以上我公司對ELISA洗滌次數做出的心得點評,如需了解相關技術問題,歡迎您隨時我司業務員。

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