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“上海恒遠”文獻：復合載蛇床子素支架材料修復兔下頜骨缺損的實驗研究
閱讀：455 發(fā)布時間：2019-5-24實驗研究
郭延偉 李松 房殿吉＊
（佳木斯大學附屬口腔醫(yī)院頜面外科 黑龍江 佳木斯 １５４０００）
［摘要］ 目的：探討 ＢＭＳＣｓ／ＰＲＦ 復合載蛇床子素支架材料修復兔下頜骨缺損的實驗研究的可行性。方法：３６ 只新西蘭大白兔隨機分為３組，每組１２只，雙側(cè)下頜骨制備缺損模型。Ａ 組植入 ＢＭＳＣｓ／ＰＲＦ 復合載蛇床子素支架材料；Ｂ 組植入 ＢＭＳＣｓ復合載蛇床子素支架材料，Ｃ 組單植入納米羥基磷灰石支架材料。分別于術(shù)后２、４、８、１２ 周處死實驗動物，制備組織標本，行大體觀察、影像學分析、ＨＥ 染色、掃描電鏡檢測，并對影像學分析值及成骨情況加以評價，對分析數(shù)據(jù)結(jié)果使用ＳＰＳＳ１７．０統(tǒng)計軟件進行分析，Ｐ ＜０．０５ 有統(tǒng)計意義。結(jié)果：影像學檢查及組織學染色顯示 Ａ 組骨缺損處愈合程度，成骨速度及其質(zhì)量明顯優(yōu)于 Ｂ組Ｃ 組；掃描電鏡顯示 Ａ 組該復合材料與組織相容性好，無炎癥刺激反應；統(tǒng)計牙 ＣＴ 分析數(shù)據(jù)及新生骨面積，Ａ 組的成骨情況明顯優(yōu)于Ｂ 組與Ｃ 組（Ｐ ＜０．０５）。結(jié)論：ＢＭＳＣｓ／ＰＲＦ 復合載蛇床子素支架材料有明顯骨誘導作用，是一種新型復合材料，可望成為臨床應用中修復頜骨缺損的新型材料。
［關鍵詞］ 骨 頜骨缺損 骨髓間充質(zhì)干細胞 ＢＭＳＣｓ 富血小板纖維蛋白 ＰＲＦ 蛇床子素 Ｏｓｔｈｏｌ
［中圖分類號］ Ｒ７８２．４
［文獻標識碼］ Ａ
［文章編號］ １６７１—７６５１（２０１２）１１—１０８７—０５
下頜骨功能結(jié)構(gòu)復雜，而造成其缺損的原因也很多，若不及時進行修復或修復不當，則常常會造成骨不連或延遲愈合等嚴重后果。隨著當代組織工程學及分子生物學的迅猛發(fā)展，利用干細胞作為種子細胞復合支架材料修復骨缺損成為近年來研究的熱點，骨髓間充質(zhì)干細胞（ＢＭ－ ＭＳＣｓ）以其多項分化的潛能及自身所具有的遺傳背景穩(wěn)定和對機體無免疫排斥反應等優(yōu)點成為理想的種子細胞［１～３］。ＰＲＦ是繼富血小板血漿（ｐｌａｔｅｌｅｔ－ｒｉｃｈｐｌａｓｍａ，ＰＲＰ）后第２代血小板濃縮液，以血小板凝膠形式呈現(xiàn)，其所內(nèi)含的高濃度的生長因子能促進骨組織和軟組織再生修復，單獨或聯(lián)合其他生物材料注人硬組織缺損或軟組織創(chuàng)傷處，可以修補缺損，誘導生長，加速局部創(chuàng)傷的愈合并提高愈合質(zhì)量［４～６］。實驗證明，蛇床子素 可 促 進 大 鼠 骨 髓 間 充 質(zhì) 干 細 胞 （ＢＭ －ＭＳＣｓ）的增殖及向成骨細胞分化并抑制其向脂肪細胞分化，而且蛇床子素具有促進成骨細胞增殖的能力［７，８］。本研究將骨髓間充質(zhì)干細胞作為種子細胞，以載蛇床子素的羥基磷灰石為支架材料，結(jié)合ＰＲＦ 中多種生長因子及其誘導并促進成骨修復兔下頜骨缺損，為臨床應用提供了理論依據(jù)。
１ 材料與方法
１．１ 實驗動物 健康新西蘭大白兔３６ 只，體重２．
０～３．０ｋｇ，３～６月齡，雌雄不限，（由佳木斯大學動物實驗中心提供），材料及儀器：醫(yī)用納米級羥基磷灰石（上海源葉生物科技有限公司），蛇床子素（上海恒遠生物科技有限公司），離心機，ＪＳＭ －６３６０ＬＶ掃描電鏡，倒置相差顯微鏡，牙 ＣＴ。
１．１．１ 骨髓間充質(zhì)干細胞的獲取及培養(yǎng) 無菌條件下，骨髓穿刺針兔雙側(cè)股骨大轉(zhuǎn)子處抽取骨髓３～５ ｍＬ，然后加入 ２０ ｍＬ 的 ＤＭＥＭ 培養(yǎng)液中混勻，過濾雜質(zhì)后以１５００ｒ／ｍｉｎ 離心２０ ｍｉｎ，離心完后取上層骨髓，加入５ ｍＬ 制成 ＤＭＥＭ 培養(yǎng)液制成單細胞懸液（細胞數(shù)為１０ 個／ｍＬ），然后置入容積為３０ ｍＬ 的培養(yǎng)瓶中，加入１０ｍＬ 含２０％新生小牛血清、青霉 素 １００ Ｕ／ｍＬ、硫 酸鏈霉素 １００ｇ／ｍＬ 的ＤＭＥＭ 培養(yǎng)液，再次離心１２００ｒ／ｍｉｎ離心１０ ｍｉｎ，去上清，計數(shù)。然后置入３７ ℃、５％ＣＯ２ 培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。細胞培養(yǎng)２４ｈ貼壁，呈梭形成纖維樣細胞生長，７２ｈ后大量細胞成纖維樣生長，部分區(qū)域成漩渦樣細胞群，見圖１。在細胞種植的第４ 天第１ 次換液，以后每２ｄ換液１ 次，細胞生長７～１０ｄ 后長滿瓶底面積的８０％時２．５％胰蛋白酶收集計數(shù)并傳代。
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