化工儀器網
技術文章
ELISA實驗結果為什么有時候會復測？
閱讀：643 發布時間：2023-3-6在ELISA實驗過程中時常會出現復測現象即我們時常說的"花板"現象，這種現象影響檢驗結果的正確判讀，對工作造成一定的不利影響，一旦出現“花板"，實驗結果必須放棄，重新進行，不僅浪費物料和時間，而且還會出現樣本量缺少、交叉污染、報告延遲等一系列問題。
影響因素分析如下：
一、標本因素
正確處理標本，防止大規模溶血、血漿層異物、使用一次性加樣槍頭，防止交叉污染。血清和血漿均可以用于檢測，但血清的分離應在抽血后等血液wan全凝固后再離心。
二、試劑因素
正確保存及使用有效試劑。使用過期試劑及底物接觸金屬容器、底物混合后放置時間較長均影響實驗結果的準確性。選擇試劑時應選擇靈敏度高、特異性好、穩定性好，批間差小的試劑。不同廠家的試劑不能混用，包括底物和洗滌液。檢測前應將試劑放置室溫平衡半小時，洗滌液應現用現配，同時觀察濃縮洗滌液中有無結晶，若有結晶應放37℃水浴中融化后才可使用。
三、技術人員操作因素
嚴格按照相關實驗SOP操作實驗。加樣時應盡可能的垂直加樣，并加在包被孔的底部（注：勿應用力過度破壞底部包被物質），不可加在孔的上部及外部。
四、溫浴的因素
使用水浴箱作為溫浴設備時，應注意水的深淺對結果的影響，當水浴箱中水的的實測溫度37℃時，則水面溫度可能只有34℃，空氣溫度更低，甚至只有二十多度，所以當水浴箱中水位過低時則酶標微孔板沒有浸入水中，則反應溫度會達不到37℃，相應的就會影響酶促反應。為防止邊緣效應，酶標板應盡量浸入水中，以保證受熱的均勻。水浴時，酶標板應封好，以免水滴滴入包被孔中，或陽性標本的蒸發。嚴格掌握溫浴時間，不可為了早點出結果擅自縮短溫浴時間。
五、洗板機的因素
廢液瓶裝滿后應及時清空，以防止廢液回流對管道的污染，而使洗滌不che底，造成“花板"。洗板結束后應用蒸餾水che底清洗管道，以防止廢液在管道中的殘留。同時應根據儀器維護保養程序，定期對洗板機進行維護保養。
六、酶標儀
酶標儀應安置在避光條件下，比色前應提前15-30分鐘開機預熱，這樣測定結果會更穩定。為防止顯色的加深或減弱，顯色時間完成后應立即滴加終止液（避免氣泡產生），并在10分鐘內完成比色。酶標板從水浴箱取出后應擦凈孔底水滴，若有水滴或紙屑殘留在孔底，會造成酶標儀讀數錯誤，誤判定為“花板"。