化工儀器網
技術文章
ELISA試劑盒包被抗原的選擇
閱讀：2593 發布時間：2019-10-24 ELISA試劑盒加樣的優化：
在這一過程中，一般情況下有三次加樣，它們分別是加標本，加酶聯絡物，加底物。小分子抗原比如多肽以及一些小分子有機化合物，由于分子量太小，一般難于直接吸附在酶標板上，一般都先使其與無關蛋白質，比如BSA等偶聯，偶聯物吸附于固相載體上。凍住血清融解后，蛋白質有些濃縮，散布不均，應充沛混勻宜輕緩，防止氣泡，可上下倒置混和，不要在混勻器上劇烈振蕩。也可在板孔中參與稀釋液，再在其參與血清標本，然后在微型轟動器上轟動1分鐘以確保混和。一般說來，在5天內測定的血清標本可放置于4℃，逾越一星期測定的需低溫冰存。
ELISA試劑盒抗原包被選擇：
獸藥殘留檢測大部分藥物因分子量小，難于直接吸附于固相載體上，因此需要將小分子藥物經過改造成合適的半抗原，再將半抗原與大分子的載體蛋白偶聯（通常是利用半抗原分子中含有一定數量的游離基團，如巰基、氨基、醛基、羧基、酮基、苯酚基、咪唑基等，這些基團可與蛋白質分了中的對應基團在偶聯劑的作用下發生偶聯反應），從而形成半抗原-載體蛋白復合物，半抗原-載體蛋白復合物通過載體蛋白吸附到固相載體上，實現小分子藥物的包被過程。常用的載體蛋白有： 牛血清白蛋白(BSA) 、人血清白蛋白（HSA）、牛的免疫球蛋白（TRP）、雞的卵清蛋（OVA）、血藍蛋白（KLH）等。
ELISA試劑盒包被條件的優化：
包被液的選擇：一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液，假設包被的抗原在堿性條件下不穩定的話，也可以使用pH7.2的磷酸鹽緩沖液。制備血漿標本需借助于抗凝劑，而血清標本只需待血清天然凝結、縮短后即可取得。
包被濃度的選擇：包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質改變，一般蛋白質的包被濃度為1-5ug/ml，要明晰關于特定包被抗原的zui適包被濃度需求經過實驗來判定。
包被溫度的選擇：一般是4-8度條件下放置一個黑夜或許37度保溫2小時，我們劇烈主張4-8度條件下包被，有利于蛋白活性的堅持。