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看過來?樣品的收集
閱讀：1807 發(fā)布時(shí)間：2019-7-24
做實(shí)驗(yàn)步就是樣品收集，看似簡單的一項(xiàng)工作，其實(shí)也是重中之重！每一步都必須小心謹(jǐn)慎，這樣才能保證實(shí)驗(yàn)更順利出色的完成。下面讓我們一起看看樣品是如何收集的：
一： 腹水采集分成兩類：
1.活著抽取腹水活著抽取腹水主要用到的是酒精棉球與注射器（2-5ml） 以及滅后菌的eppendorf管(因?yàn)楦顾€要分離所以用這個(gè)，便于離心）。方法就是用酒精棉球擦拭要進(jìn)針的位置（大概是在腹部中線偏右側(cè)處）， 而后先讓注射器中留點(diǎn)空氣而后進(jìn)針再將注射器慢慢往后推腹腔中有壓力慢慢腹水會(huì)往外流，進(jìn)針時(shí)要輕輕下上提一下，感覺*就好。
2.處死抽取腹水處死抽取腹水就是用止血鉗兩把，剪刀小號(hào)2把，鑷子2把即可。 先用剪刀鑷子輕輕在小鼠腹腔外皮剪一個(gè)小口，而后用兩把止血鉗輕輕兩邊拉開，使露出腹部，而后用另一把剪刀鑷子剪開內(nèi)皮，用槍或玻璃直管即可去腹水。也建議放置eppendorf中。
二：胸水的采集：
主要采用胸腔穿刺法收集實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的胸水，也可處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物剖開胸腔采集胸水。
三：穿刺點(diǎn)定位：
于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物脊側(cè)腋后線第11～12肋間隙穿刺，穿刺針緊貼肋骨上緣，否則容易損傷肋間神經(jīng)。此部位是肺下界之外側(cè)，既可避免損傷肺組織造成氣胸，又易采集在隔肋竇的胸水。此外，也可在腹側(cè)胸壁近胸骨左側(cè)緣第4～5肋間隙穿刺。
穿刺方法：
實(shí)驗(yàn)動(dòng)物取立位或半臥位固定，局部皮膚去毛、消毒、麻醉，穿刺針頭與注射器之間接三通連接裝置，實(shí)驗(yàn)人員以左手拇指、食指繃緊局部皮膚，右手握穿刺針緊*肋骨下緣處垂直進(jìn)針，穿刺肋間肌時(shí)產(chǎn)生一定阻力，當(dāng)阻力消失有落空感時(shí)，說明已刺入胸膜腔，用左手固定穿刺針，打開三通連接裝置，緩慢抽取胸水。
操作中嚴(yán)防空氣進(jìn)入胸腔，始終保持胸腔負(fù)壓。穿刺應(yīng)用手控制針頭的深度，以防穿刺過深刺傷肺臟。
建議保存在-80度冰箱。
四：腦脊液：請(qǐng)離心后收集上清，并將標(biāo)本保存于-20oC，且應(yīng)避免反復(fù)凍融。
五：尿液：請(qǐng)收集清晨次尿液（中段尿），或24 小時(shí)尿液，2000×g 離心15 分鐘后收集上清，并將標(biāo)本保存于-20oC，且應(yīng)避免反復(fù)凍融。
細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它生物標(biāo)本：請(qǐng)1000×g離心20分鐘，取上清即可檢測，或?qū)⑸锨逯糜?20oC或-80oC保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
六：細(xì)胞裂解液：
1）貼壁細(xì)胞需要先用胰酶消化，離心收集細(xì)胞（懸浮細(xì)胞可直接離心收集）；
2）將收集到的細(xì)胞用冷PBS洗3次；
3）物理方法裂解細(xì)胞（可先超聲破碎細(xì)胞，再反復(fù)凍融）：
i 超聲破碎：取適量PBS重懸細(xì)胞，用一定功率的超聲波處理細(xì)胞懸液，使細(xì)胞急劇震蕩破裂。
ii 反復(fù)凍融：將待破碎的細(xì)胞在-20oC以下冰凍，室溫融解，反復(fù)3次，使細(xì)胞溶脹破碎。
4）將標(biāo)本于2-8oC 1500×g離心10分鐘，收集上清備用。
七：組織勻漿：
1） 取適量組織塊，于預(yù)冷PBS（0.01mol/L, pH 7.0-7.2）中清洗去除血液，稱重后備用（組織塊較大需先剪碎后再勻漿）；
2） 可同時(shí)選用多種勻漿方法達(dá)到較好的破碎效果：首先將組織塊移入玻璃勻漿器，加入5-10mL預(yù)冷PBS進(jìn)行充分研磨，該過程需在冰上進(jìn)行（有條件實(shí)驗(yàn)室可選用機(jī)器勻漿）；得到的勻漿液可再利用超聲破碎或反復(fù)凍融進(jìn)一步處理（超聲破碎過程中注意冰浴降溫；反復(fù)凍融法可重復(fù)2次）。
3） 將制備好的勻漿液于5000×g離心5分鐘，留取上清即可檢測。
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