化工儀器網
技術文章
恒遠告訴您:細菌轉化的操作步驟
閱讀：2703 發布時間：2017-10-20細菌轉化
操作步驟
（1）事先將恒溫水浴的溫度調到42℃。
（2）從-70℃ 超低溫冰柜中取出一管（100μl）感受態菌，立即用手指加溫融化后插入冰上，冰浴5~10min。
（3） 加入5μl連接好的質粒混合液（DNA含量不超過100ng），輕輕震蕩后放置冰上20min。
（4） 輕輕搖勻后插入42℃水浴中1~2min進行熱休克，然后迅速放回冰中，靜置3~5min。
（5） 在超凈工作臺中向上述各管中分別加入500μl LB培養基（不含抗菌素）輕輕混勻，然后固定到搖床的彈簧架上37℃震蕩1h.
（6） 在超凈工作臺中取上述轉化混合液100~300μl，分別滴到含合適抗菌素的固體LB平板培養皿中，用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻（注意：玻璃涂布棒上的酒精熄滅后稍等片刻，待其冷卻后再涂）。
（7） 如果載體和宿主菌適合藍白斑篩選的話，滴完菌液后再在平板上滴加40μl 2% X-gal，8μl 20% IPTG，用酒精燈燒過的玻璃涂布棒涂布均勻。
（8） 在涂好的培養皿上做上標記，先放置在37℃恒溫培養箱中30-60min直到表面的液體都滲透到培養基里后，再倒置過來放入37℃恒溫培養箱過夜。
（9） 在被細菌污染的桌面上噴灑70%乙醇，擦干桌面，寫實驗報告。
（10）觀察平板上長出的菌落克隆，以菌落之間能互相分開為好。注意白色菌斑。
上海恒遠生物有限公司是一家全國性專業經銷生化試劑，分子生物學試劑，免疫試劑，本公司經營品種多，質量好，價格合理，訂貨快速，交貨及時，如需要訂購我司ELISA檢測試劑盒,ELISA檢測試劑盒價格,進口ELISA檢測試劑盒,培養基,培養基價格,進口培養基,elisa試劑盒,elisa試劑盒價格請電來咨詢。