細胞凋亡羅丹明123染色試劑盒
（Cell Apoptosis Rhodamine 123 Detection Kit）
Store at-20℃ for one year
Expire date：
一、試劑盒說明
羅丹明123（Rhodamine 123）是一種可透過細胞膜的陽離子熒光染料，是一種線粒體跨膜電位的指示劑。其在正常細胞中能夠依賴線粒體跨膜電位進入線粒體基質,熒光強度減弱或消失。而在凋亡發生時，線粒體膜完整性破壞，線粒體膜通透性轉運孔開放，引起線粒體跨膜電位（ΔΨm） 的崩潰, Rh123 重新釋放出線粒體, 從而發出強黃綠色熒光，可用熒光顯微鏡、熒光光度計或流式細胞儀檢測，通過熒光信號的強弱來檢測線粒體膜電位的變化和凋亡的發生。
本試劑盒適用于培養的細胞或從組織中提取出的線粒體的膜電位檢測。
二、試劑盒組份
| 組分 | KGA217（100 assays） | 儲存條件 |
| 羅丹明123染液（1 mg/mL） | 1 mL | -20℃ |
| 5×Assays Buffer | 20 mL | -20℃ |
備注：1×Assays Buffer工作液配制：用前將5×Assays Buffer 用雙蒸水稀釋5倍。
三、試劑盒以外自備儀器和試劑
流式細胞儀、熒光光度計或熒光顯微鏡：
激發波長488～505nm，發射波長515～575 nm （一般為530nm）；
線粒體提取試劑（可選購凱基線粒體提取試劑盒，CAT NO:KGA827）及儀器；
5% CO2細胞培養箱、微量移液器、1.5m L Microtube、載玻片
四、操作方法
1．細胞染色及分析
（1）培養細胞1×106/mL重懸于培養基中；
（2）加入羅丹明123染液0.1μg/mL～50 μg/mL （根椐細胞種類不同而濃度不同，一般3～10 μg/mL）；
（3）37℃，5% CO2細胞培養箱孵育1～30 min（根椐細胞種類不同而不同，一般10 min）；
（4）離心以培養基洗細胞兩次；
（5）重懸細胞于培養基中，37℃，5% CO2培養60 min；
（6） 流式細胞儀檢測：激發波長488～505nm，發射波長515～575 nm （一般為530nm）；
熒光顯微鏡觀察：滴加100μL上述混合液于載玻片上，激發濾光片波長488nm，阻斷濾光片波長515nm觀察，拍照。
2． 組織提取的線粒體染色及分析
（1）按常規方法提取的線粒體，用適量的1×Assays Buffer（將5×Assays Buffer 用雙蒸水稀釋5倍）重懸；
（2）常規方法進行蛋白含量測定后，用1×Assays Buffer調配成3mg/mL的線粒體溶液；
（3）取2mL 1×Assays Buffer和1mL線粒體溶液；
（4）加入適量待測化合物（同時設空白對照組），250C保溫3 min；
（5）加入羅丹明123染液10μL；
（6） 熒光光度計檢測：上述混合液全部加入石英比色皿中，置于250C下測定，激發波長488～505nm，發射波長530nm，連續記錄從0 min～30 min內熒光強度的變化。
