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細胞凋亡形態學檢測試劑盒
  • 細胞凋亡形態學檢測試劑盒
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貨物所在地：江蘇南京市

更新時間：2025-06-24 21:00:07

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細胞凋亡形態學檢測試劑盒

 凋亡細胞形態學檢測試劑盒（光學顯微鏡）
（Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit）
Cat number：KGA               For Research Use Only
Store atRT for one year
Expire date：

一、試劑盒說明
形態學檢測是研究細胞凋亡的zui基本方法。細胞凋亡的形態學變化是多階段的，起初，細胞間連接和微絨毛消失，細胞體積縮小，胞漿凝縮，內質網變疏松并與胞膜融合，形成一個個空泡，核糖體與線粒體等細胞器聚集，結構尚無明顯改變，細胞核內的染色質逐漸凝聚成新月狀附在核膜周邊，細胞核固縮呈均一的致密物，進而斷裂成碎塊，此時細胞膜仍保持完整：然后，胞膜及核膜不斷出芽、脫落，一個細胞變成數個大小不等的有膜包裹的凋亡小體：zui后凋亡小體被周圍具有吞噬能力的細胞吞噬、消化。上述這些形態學的變化，可以通過本試劑盒中的染色及光學顯微鏡觀察。
二、試劑盒組份
組份
KGA220（100 assays）
儲存條件
Dye Reagent 1
10mL
室溫，避光
Dye Reagent 2
1mL
室溫，避光
Buffer A
10mL
室溫
注：Dye Reagent 2使用前，用Buffer A稀釋10倍后染色。
三、試劑盒以外自備儀器和試劑
光學顯微鏡、低速離心機、微量移液器、1.5m L Microtube、載玻片、蓋玻片、甲醇、體積分數為1%鹽酸的80%乙醇、無水乙醇、二甲苯、封片樹脂
四、使用注意事項
利用血球計數板進行該項操作時，不要用血計板配套的質地較硬的蓋玻片，而用普通的蓋玻片反而更利于結果的觀察。
五、操作方法
1．   用適當的方法誘導細胞凋亡，消化收集細胞；
2．   用PBS洗滌細胞二次，并調成濃度為1×106cells/ml細胞懸液；
3．   吸取50~100μL的細胞懸液均勻涂布于載玻片（A片）上或用離心涂片機制片，室溫晾干，甲醇固定5 min；
4．   在A片上滴加數滴100μL的Dyes Reagent 1室溫染色1 min，用水輕輕洗去染液；
5．   在含體積分數為1%鹽酸的80%乙醇中分化10 S，流水沖洗1 min，晾干，顯微鏡下觀察細胞的形態。
6．   在另一張涂有細胞并已于無水乙醇固定2min的載玻片（B片）上滴加100μL染色液2   （Dyes Reagent 2 ：Buffer A=1:9的混合液），室溫染色5～20min，用水輕輕洗去染液，室溫晾干；
7．   二甲苯浸泡3 min，以去除雜質，使載玻片透明，zui后樹脂封片，顯微鏡下觀察細胞形態；
8．   觀察200-500個細胞，計數凋亡細胞所占的比例。
結果分析：
A片：凋亡細胞皺縮，胞膜完整。染色質凝聚，嗜堿性增強，染成深藍色，呈環狀或新月狀附在核膜周圍，或細胞核固縮碎裂成數個圓形顆粒，核膜消失。而壞死細胞體積增大，染色質變稀疏成網狀，嗜堿性減低，染成淡藍色，胞核破碎，細胞膜不完整。
B片：凋亡細胞皺縮，胞膜完整。胞漿稀少或缺乏，染成淡紅色，染色質凝聚，染成深紫色，細胞核固縮碎裂成數個圓形顆粒。
計算細胞凋亡率和死亡率：
細胞凋亡率=凋亡細胞/細胞總數×*
細胞死亡率=壞死細胞/細胞總數×*

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