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上海起發實驗試劑有限公司

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供應簡介

HMGB1 蛋白，分子量約30KD。HMGB蛋白是非組蛋白的重要組成成分，同時被認為是重要的轉錄調控因子。HMGB1蛋白的主要受體包含晚期糖基化終產物受體。

詳細介紹

HMGB1 ELISA 檢測試劑盒

1 簡介

HMGB1 蛋白，分子量約30KD。HMGB蛋白是非組蛋白的重要組成成分，同時被認為是重要的轉錄調控因子。HMGB1蛋白的主要受體包含晚期糖基化終產物受體。

HMGB1蛋白zui近被認為是感染性休克病晚期炎癥反應的介質。許多疾病發生時HMGB1蛋白的濃度會增高，包括關節炎、急性肺損傷、癌癥、彌漫性血管內凝血及外科手術。

2 應用

用于定量檢測人、牛、豬、兔、小鼠、大鼠、血清、血漿、腦脊髓液、細胞培養上清，支氣管肺泡灌洗液中的HMGB1蛋白。不受人、牛、豬、兔、大鼠、小鼠血清\血漿，細胞培養上清、腦脊液、支氣管肺泡灌洗液中HMGB2蛋白的干擾。

注：該試劑盒只限科研應用，非診斷試劑。

3 試劑盒組成

組成	數量/規格
HMGB1多克隆抗體包被板	96孔（8X12）
POD 標記抗HMGB1 單抗（凍干粉）	1瓶，12ml
標準品（豬HMGB1，凍干粉）	1瓶
陽性對照（豬HMGB1，凍干粉）	1瓶
樣品稀釋液（緩沖液包含添加劑和防腐劑）	1瓶，20ml
POD標記抗體稀釋液（緩沖液包含添加劑和防腐劑）	1瓶,12ml
顯色劑A	1瓶,6ml
顯色劑B	1瓶,6ml
終止液（0.35mol/L 的硫酸）	1瓶,12ml
5X 洗液（5x 洗滌緩沖液包含吐溫20）	2瓶,100 ml
封板膜	2張

4 檢測原理

HMGB1 ELISA 檢測試劑盒應用2步法夾心ELISA 檢測HMGB1蛋白。96孔板已包被HMGB1的特異性多抗。加入檢測樣本。HMGB1蛋白特異性結合包被抗體。加入POD標記的HMGB1 單抗，形成抗原抗體復合物，加入顯色底物顯色。加終止液終止后，檢測450nm的OD值。

5 操作程序

5-1實驗器材

微量移液器、量筒、洗板機、振蕩器、EP管、溫箱（37℃，25℃ ）、酶標儀

5-2 試劑準備

包被板：可以直接使用，已包被抗體。重新裝好剩余的板條，2-8℃保存

樣品稀釋液：直接使用。

標準品：用樣品稀釋液稀釋標準品，終濃度320ng/ml。參考小瓶上標簽說明操作。輕輕混勻，靜置10min,使充分溶解。按表1所示，對標準品做倍比稀釋。稀釋后的標準品和未稀釋的標準品，可在-30℃保存1個月。避免反復凍融，每個實驗都需做標準品的倍比稀釋。

陽性對照：用樣品稀釋液稀釋陽性對照品。參考小瓶上標簽說明操作。輕輕混勻，靜置10min,使充分溶解。陽性對照品的濃度范圍，參照小瓶標簽上濃度。稀釋后的標準品和未稀釋的標準品，可在-30℃保存1個月。避免反復凍融。

POD 標記抗體稀釋液：用全部稀釋液，稀釋POD標記抗體。輕輕混勻，靜置10min,使充分溶解。陽性對照品的濃度范圍，參照小瓶標簽上濃度。稀釋后的標準品和未稀釋的標準品，可在 -30℃保存1個月。避免反復凍融。

底物稀釋液：用之前請先置于室溫，等體積混合溶液A 和溶液B。

終止液：直接使用

洗脫液：用蒸餾水4：1稀釋5X 洗脫液。

表1：標準品稀釋方法

稀釋方法	濃度（ng/ml）
S1:300ul樣品稀釋液中，加入100ul 320ng/ml 的標準品稀釋液混合。	80
S2:100ul樣品稀釋液中，加入100ul S1,混勻。	40
S3: 100ul樣品稀釋液中，加入100ul S2,混勻。	20
S4: 100ul樣品稀釋液中，加入100ul S3,混勻。	10
S5: 100ul樣品稀釋液中，加入100ul S4,混勻。	5
S6: 100ul樣品稀釋液中，加入100ul S5,混勻。	2.5

5-3 樣品準備

1000 xg 離心15min，從采血管中迅速收集血清/血漿。如果離心不充分或血清/血漿在血細胞中相當長時間后，由于細胞溶解，HMGB1蛋白水平會增高。收集的血清/血漿樣品，需保存到-80℃。避免反復凍融。

HMGB1水平可通過檢測細胞培養上清，腦脊液，支氣管肺泡液來檢測。對于FBS（胎牛血清）培養的細胞上清，FBS中的牛的HMGB1水平也需要檢測，因此需要做一個陰性對照。

如果樣品HMGB1的濃度太高，超過了標準品zui高濃度，請稀釋樣品后再檢測。

5-4 注意事項：

1 所有試劑在用之前室溫放置至少30min。

2 有可能會在一些孔中看到晶體，但這并不影響實驗，沒有必要在用之前對其洗滌。

3 每個實驗都必須做標準曲線。

4 用塑料管稀釋樣品盒標準品。

5 如實驗需更高靈敏度，請參照第6部分說明。

5-5 實驗程序

1 每孔中加入100ul 樣品稀釋液。

2 空白孔加入10ul 樣品稀釋液。

3 加入10ul 標準品和樣品到對應的孔。如果有陽性對照，加入10ul 樣品對照。

4 用振蕩器振板混勻后，用封板膜封板，37℃孵育20-24 小時。振板時，請小心，避免液體濺出孔外。

5 用洗液（400ul/孔）人工或洗版機洗板5次。zui后一次洗完后，倒扣板，置干凈的吸水紙上，拍板4-5 次，去除孔內的液體。

6 每孔加入100ul POD 稀釋液。

7 用封板膜封板，25℃ 孵育2小時。

8 用洗液（400ul/孔）人工或洗版機洗板5次。zui后一次洗完后，倒扣板，置干凈的吸水紙上，拍板4-5 次，去除孔內的液體。

9 清潔板的背面，不要劃傷孔底，以免影響檢測結果。

10 加入100ul 底物溶液加樣間隔時間相同，用封板膜封板，避免反應中受其它物質的污染。

11 加入100ul 終止液。（加樣間隔時間相同）

12 在加入終止液60分鐘內，讀取波長450nm OD值。

13 減去空白孔OD值。從標準曲線，計算樣品的OD值。如果檢測樣品是稀釋后的樣品，實際樣品濃度為標準曲線計算濃度乘以稀釋倍數。

6 檢測參數

檢測范圍：2.5-80ng/ml

靈敏度：1ng/ml

重復性：批內差異 CV < 10% （n= 8）

批間差異 CV < 10% （n= 8）

回收率：80-120%

按以下操作程序，檢測靈敏度可達到0.2 ng/ml：

1）每孔加入50ul 樣品稀釋液。

2）加入50ul 樣品稀釋液（空白孔）、標準品及檢測樣品

3）后續操作按5-5 操作程序的第4步開始做。對于這個檢測范圍，標準品濃度應稀釋至10ng/ml 以下。檢測的特異性、重復性、回收率不變。

7 保存期和有效期

有效期截止日期參照盒上注明。2-8度保存，不能凍。

8 注意事項

1）此試劑盒為科研用，非診斷試劑。

2）用前請閱讀試劑盒說明書和MSDS 說明書。

3）不要將不同盒子內不同批次的組分混起來用或使用盒子內過期的試劑。

4）所有試劑在使用前請置于室溫至少30min。

5）嚴格按照說明書準備試劑和檢測樣本。

6）1000 xg 離心15min，從采血管中迅速收集血清/血漿。如果離心不充分或血清/血漿在血細胞中相當長時間后，由于細胞溶解，HMGB1蛋白水平會增高。收集的血清/血漿樣品，需保存到-80℃。避免反復凍融。

7）恰當保存標準品稀釋液、陽性對照和POD標記抗體稀釋液。試劑在-30℃以下可保持穩定性1年。避免反復凍融。重新裝好未使用的板條，到干燥機的鋁箔袋，與其它試劑一并保存于2-8 ℃。

8）每個實驗都需做標準曲線。

9）仔細處理樣品，避免污染。

10）樣品稀釋液含少量的疊氮鈉，疊氮鈉如污染了鉛或銅金屬，會發生爆炸。處理時用大量的水清洗，避免疊氮鈉的成積。

11）終止液為酸（PH < 2）。因此需小心，避免接觸到皮膚或眼睛。

12）所有試劑和樣品都有潛在的危險。小心操作和處理。如果接觸到了皮膚或粘膜，用大量的水沖洗。如有其它的不良癥狀，請咨詢醫生。

訂購信息

品牌	貨號	名稱	規格
IBL	ST51011	HMGB1 ELISA kit	kit

15921799099

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