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上海起發實驗試劑有限公司
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abeomics 17-1101說明書
螢光素酶報告基因檢測試劑盒
Leeporter™ 螢光素酶檢測試劑 - 1000 測試
產品編號：17-1101
| 應用 ： | 功能分析 |
| 數量 ： | 1 個套件 |
| 內容 ： | 1000 次測試（96 孔板格式）。檢測緩沖液含有 0.01% 疊氮化納。 |
| 儲存情況 ： | 儲存于 -20°C |
Leeporter™ 螢光素酶檢測試劑經過專門配制，可與表達優化的細胞內海腎螢光素酶的 Leeporter™（螢光素酶報告基因）細胞系一起使用，該細胞系旨在產生高度敏感的信號和延長的信號強度。作為一步發光檢測試劑，Leeporter™ 螢光素酶檢測試劑可以直接添加到與所使用的光度計兼容的細胞培養板中，無需稀釋或將培養上清液或細胞裂解物轉移到其他板上。
協議：
1) 底物 (100X) 重構：
將 0.5 ml 底物重構溶液添加到凍干底物瓶中，通過輕輕上下吹打和/或倒置試管*溶解。重構的 100X 底物可在 -20 o C 的黑暗環境中儲存長達一個月。
2) 檢測緩沖液：
在室溫水浴中解凍 50 ml 的檢測緩沖液，并通過旋轉和/或輕輕渦旋*溶解任何沉淀物，直到溶液變得澄清。Assay Buffer 可以分裝（例如每份 5-10 ml）并在 -20 o C 下保存數月。
3) 完整檢測溶液的制備（適用于 96 孔板格式）：
為每次使用新鮮制備完整的檢測溶液，應在 2 小時內使用。解凍檢測緩沖液并通過渦旋和/或溫和渦旋平衡至室溫。計算需要多少完整的測定溶液（注意：96 孔板的每個孔需要 50 ul 的完整測定溶液）。將適量的 Assay Buffer 分裝到 15 ml 試管中，并加入相應量的重構 100X 底物，制成最終的 1X 底物檢測溶液。
4) 螢光素酶檢測（96 孔板格式）：
1. 在白色實心底 96 孔微孔板（注意：使用的 96 孔板應與正在使用的光度計兼容）中以 100 ul 細胞/孔，根據相應的用于您的目標 Leeporter™ 細胞系的方案（注意：每個目標 Leeporter™ 細胞系方案都可以在其相應的數據表中找到。）。[每孔總體積為 100 uL ]
2. 根據您的目標 Leeporter™ 細胞系的相應方案刺激或處理您的目標細胞。[每孔總體積變為 105~110 uL = 100 ul 細胞 + 5~10 ul 處理]
3. 完成目標細胞的刺激/處理后，將含有待測目標細胞的 96 孔板平衡至室溫 10 分鐘（注意：不要移除或擾亂細胞培養基。）。
4. 使用多道移液器，將 50 ul Complete Assay Solution 直接加入每個板孔中（注意：添加 Assay Reagent 時不要去除細胞培養基。所以 50 ul Assay Reagent 應直接添加到孔上。每個孔的細胞培養。）。[每孔總體積變為 155~160 uL = 100 ul 細胞 + 5~10 ul 處理 + 50 ul 完整檢測溶液]
5. 使用 automix 2-3 秒，然后在 1-5 分鐘內用光度計讀取板。（光度計設置示例：SpectraMaxL（Molecular Devices）：目標波長為 470nm，積分時間為 0.5 秒，自動混合為 2 秒）。
僅供研究使用。不適用于診斷/治療程序。
