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zenogenpharma STEM-CELLBANKER說明書
STEM-CELLBANKER ® EX GMP 級
（化學定義的冷凍保存溶液
描述：
STEM-CELLBANKER ® EX GMP 級 (SCB EX) 是一種細胞冷凍保存解決方案，可擴展細胞治療的可能性。SCB EX 是一種簡單的成分，由經(jīng)靜脈注射證明的成分組成。它是一種含有 DMSO 的冷凍保存溶液和一種無異種物質的產(chǎn)品，配方不含血清和動物成分。SCB EX 還可以保存人類造血干細胞和人類脂肪來源的基質/干細胞。SCB EX 的制造符合日本、歐盟、美國和 PIC/S GMP 指南。所有將產(chǎn)品暴露在環(huán)境中的操作均在 A 級區(qū)域進行，以確保無菌。
※本產(chǎn)品已在 PMDA 內(nèi)的 MF 中注冊。
※本產(chǎn)品成分與HSC-BANKER ® GMP等級相同。應用：
使用脂肪衍生基質/干細胞 (ADSC) 進行冷凍保存性能測試
測試：EMO生物醫(yī)學
1. 細胞活力測試
ADSC 與 SCB EX 一起冷凍保存 4、12、24 和 48 周。解凍后立即評估細胞活力（左圖）和解凍后過夜（右圖）。用 SCB EX 冷凍保存的細胞即使在長期冷凍保存后也顯示出高活力，即使在過夜休息后也保持高活力。
2. 細胞恢復測試
ADSC 與 SCB EX 一起冷凍保存 4、12、24 和 48 周。然后，我們評估解凍后過夜的細胞附著（細胞恢復；左圖）和解凍和培養(yǎng) 72 小時后的細胞生長速率（倍增時間；右圖）。結果表明，即使經(jīng)過長期冷凍保存，細胞恢復和細胞生長速度也沒有受到影響。
3. 小區(qū)身份測試
ADSC 與 SCB EX 一起冷凍保存 4、12、24 和 48 周。然后，我們使用流式細胞儀的陽性和陰性標記評估解凍后的細胞身份。結果表明，即使在長期冷凍保存后，用每種標記物標記的細胞百分比也不受影響。
陽性標記；CD29、CD73、CD90 和 CD105
陰性標記；CD11b、CD19、CD34、CD45 和 HLA-DR陽性標記數(shù)據(jù)
4. 細胞功能測試
（IDO 量化和抑制 T 細胞增殖測定）ADSC 與 SCB EX 一起冷凍保存 4、12、24 和 48 周。然后，我們評估了解凍后 ADSC 的細胞功能。結果表明，即使經(jīng)過長期冷凍保存，在MSCs存在下IDO表達和T細胞增殖抑制率均不受影響。
協(xié)議（CELLBANKER ®系列）
冷凍
為獲得最佳結果，冷凍保存的細胞應處于對數(shù)生長期。可以替代類似或標準的冷凍方案。
重要提示：最佳方案可能會隨細胞類型而變化。
解凍
※如果成活率低，請嘗試使用冷凍箱等慢速冷凍方法。
從儲存中取出冷凍細胞，在 37 ℃ 振蕩水浴中快速解凍。
立即將每 1ml 細胞與 10ml *細胞培養(yǎng)基稀釋并輕輕混合。
輕輕離心沉淀細胞（3-5 分鐘，1,000~2,000rpm，4 ℃）。取出上清液抽吸器。
用適當體積的*細胞培養(yǎng)基輕輕懸浮細胞。并放入培養(yǎng)瓶中。
根據(jù)標準協(xié)議繼續(xù)進一步的培養(yǎng)程序。
檢查并確保細胞培養(yǎng)物無污染、健康狀況和適當融合等。
進行細胞計數(shù)以確定細胞的活力
輕輕離心沉淀細胞（3-5 分鐘，1,000~2,000rpm，4℃）。使用吸氣器去除上清液。
用 CELLBANKER 冷凍保存培養(yǎng)基輕輕懸浮細胞（1 ml 用于 5×105 - 5×106 細胞）。
將細胞懸液以 1ml 等分試樣分裝到已標有細胞系名稱、細胞濃度、傳代日期和其他重要信息的冷凍保存小瓶中。
將小瓶直接置于-80℃保存。如有必要，在小瓶冷凍至少 24 小時后，將冷凍小瓶轉移到液氮儲罐中。
儲存和穩(wěn)定性：
儲存于 2 至 8 或低于 -20 攝氏度。該產(chǎn)品在此儲存溫度下自生產(chǎn)之日起可保持穩(wěn)定 3 年。
