產品概述

細胞系、細胞組分、生長和冷凍培養基、細胞培養服務等等。

Mycoplasma testing without c*tion

產品編號	選項
900159	不培養的支原體檢測
900159.1	培養14天的支原體檢測

產品信息“無需培養的支原體檢測”

支原體是小的原核生物，它們太小而無法在顯微鏡下看到，并且不能被普通抗生素試劑消除。支原體可能會影響細胞系的細胞生長、增殖和形態，從而可能導致不可靠的實驗結果。大約 15% 到 35% 的實驗室細胞培養物被支原體污染。因此，建議經常控制以保證無支原體的環境。

分析方法

CLS 提供支原體檢測的短期和長期測試。在前者中，樣品在到達后立即進行測試，而在后者中，開始細胞培養并在無抗生素培養 14 天后對細胞進行測試。支原體檢測是使用兩點檢測系統進行的，該系統包括 PlasmoTest™ - 支原體檢測試劑盒 (Invivogen) 和 Certus QC - mycoADVANCED 檢測試劑盒 (Certus)。

比色報告基因測定

該測試是基于細胞的比色測定。在支原體存在的情況下，報告細胞系會誘導信號級聯反應，從而觸發培養基中的顏色從紅色變為藍色。該測定在 96 孔多孔板中進行。在微孔板分光光度計中檢測 620-655 nm 的信號。檢測到所有支原體和膽原體物種，以及細胞培養物中的其他污染物，例如細菌。結果顯示在下面的條形圖中：

等溫擴增

等溫擴增是一種基于支原體特異性 DNA 的等溫擴增與使用 DNA 嵌入染料的實時檢測相結合的快速且可靠的測試。該測定法可以檢測出占污染 >95% 的六種常見的物種：口腔分枝桿菌、豬鼻分枝桿菌、精氨酸分枝桿菌、發酵分枝桿菌、人型分枝桿菌和萊氏分枝桿菌。由于序列同源性，還將檢測到其他支原體物種（肺炎支原體、雞毒支原體和滑膜支原體）。為了確定樣品是支原體陽性還是陰性，需要研究解鏈溫度 (Tm)。不同熔化溫度的結果如下所示：

出色地	顏色	樣品名稱	溫度 (°C)	結果
1	紫色的	樣本	94,65	消極的
2	粉色的	陽性對照	87,37	積極的
3	綠松石	陰性對照	94,16	消極的

等溫擴增結果的評估

所有熔化溫度及其各自的測試結果解釋如下：

樣本	以°C為單位的熔化溫度（Tm）
負控（NC）/內控（IC）	94.8 +/- 0.2
陽性對照 (PC)	87.9 +/- 0.2
支原體陽性 - 支原體DNA擴增	87.0 - 89.2
支原體陽性 - 被少量支原體污染；支原體 DNA 的擴增和內部對照	87.0 - 89.2 和 95.0 +/- 0.2
支原體陰性 - 擴大內部控制	95.0 +/- 0.2
被其他細菌污染或非特異性擴增	89.5 - 94.0

比色報告分析結果的評估

如果測試呈陽性，則存在 5*10 2 – 5*10 5范圍內的菌落形成單位 (CFU) 。不同支原體種類的 CFU/ml 詳細列表如下所示：

支原體種類	靈敏度 CFU (ml)
A.laylawii	2.5*10 3
M. arginini	2.0*10 3
發酵菌	5.0*10 2
M. hyorhinis	7.0*10 2
口腔桿菌	5.0*10 5