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上海起發實驗試劑有限公司
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mNSET 小鼠裝置 60010 非手術胚胎移植說明
產品信息
目錄號 #60010
EtO（環氧乙烷）滅菌處理
每盒 10 個設備（設備單獨包裝，每個密封袋中有 1 個小窺器和 1 個大窺器。）
信息：非手術胚胎移植方法和裝置9,615,903。 [ PDF ]
有可能的使用
該裝置用于將小鼠胚胎經子宮頸移植到受體雌性小鼠中。僅用于研究目的。 不適用于人類或動物的診斷或治療用途。
其他用途：mNSET 60010 設備還可用于人工授精 (AI) 或其他材料/病原體轉移到受體雌性小鼠中。
處理
設備僅供一次性使用。使用后丟棄。
在 mNSET 胚胎移植之前
為了生產用于移植的小鼠胚胎和作為受體的假孕雌性，使用標準的轉基因方法。1 與標準轉基因程序中的雄性和雌性小鼠交配。如果需要，女性捐贈者可以超排。胚胎在 EmbryoMax® KSOM 培養基 (Millipore#MR-106-D) 或所需的培養基中培養。在 mNSET 移植當天，胚胎應在性交后 3.5 天（3.5 dpc）；受體雌性小鼠在 mNSET 轉移當天應為 2.5 dpc。
mNSET 演示視頻
可以在此處查看和下載快速程序和完整程序演示視頻。快速程序視頻演示了使用 mNSET™（非手術胚胎和精z移植）小鼠裝置 60010 可以輕松完成小鼠子宮胚胎移植。完整的程序視頻詳細介紹了整個設置和準備，直至實際程序結束.
胚胎移植程序
1. 將 15μl 培養基滴到 60 毫米組織培養皿（Falcon 353002 或類似產品）的蓋子上。
2. 使用標準胚胎處理移液器將 12–20 個囊胚加載到培養基中。（注意：要移植的最佳胚胎數量會因小鼠品系和胚胎接受的操作而異。）
3. 將 mNSET 裝置放在已設置為 1.8μl 的 P-2 Pipetman 上。（推薦的移液器是 Pipette Rainin Classic PR2，0.1-2μl 或 Gilson Pipetman P2，0.2-2μl。）
4. 將移液器柱塞按到第一次停止，將 mNSET 裝置的降低到培養基中，然后將胚胎慢慢拉入尖。從介質中取出 mNSET 設備尖。
5. 小心地將移液器設置為 2.0μl，在 mNSET 尖產生一個小氣泡，以幫助確保胚胎在插入鼠標期間留在設備尖內。輕輕地將裝有吸頭的移液器放在一邊（靠近籠子），以便在第 9 步中使用。避免推擠 mNSET 尖。
6. 將未麻醉的雌性接受者放在帶有金屬絲架的籠子頂部，讓鼠標“抓住"籠桿表面。用拇指和食指抓住尾巴根部，將尾巴向上傾斜，同時用手的另一邊輕輕按壓尾巴根部。（見下圖。）
7. 將小窺器輕輕放入小鼠陰道。
8. 可選：取下小窺器，換上大窺器。如果需要，使用足夠的光源并觀察子宮頸。
9. 如步驟 6 所述，用一只手握住雌性鼠標，小心地拿起移液器，然后將 mNSET 設備尖輕輕插入窺器并穿過子宮頸。一旦 mNSET 設備集線器接觸窺器，通過將柱塞壓到第一站來排出胚胎。
10. 在不松開移液管柱塞的情況下輕輕取出 mNSET 裝置并取出窺器。將鼠標放回籠中。不需要術后監測。
參考
1Behringer R、Gertsenstein M、Nagy KV、Nagy A. 2014 年。 操縱小鼠胚胎：實驗室手冊，第四版。冷泉港（紐約）：冷泉港實驗室出版社。
本產品僅供研究使用。
注意：不適用于人類或動物的診斷或治療用途。
購買不包括或攜帶任何將本產品作為獨立產品或作為另一產品的組件轉售或轉讓的權利。
PARATECHS 公司有限保修
ParaTechs 保證，在發貨時，產品將符合產品隨附的規格。本保證限制了 ParaTechs 更換產品的責任。PARATECHS 對產品不作任何其他明示或暗示的保證；包括對任何特定用途的適銷性或適用性的任何保證，或者產品不會侵犯任何第三方的任何專有權利。
用于小鼠的 mNSET 裝置 60010 有用的提示
以下是來自我們的科學家、技術人員和客戶的提示和建議，這些提示和建議已被證明是有幫助的。
1. 在開始 mNSET 試用之前，請仔細閱讀所有“有用的提示"和 mNSET for Mice 60010 說明插入。 在 NSET 的每個盒子中都可以找到說明插頁。
2.在實際實驗之前，在沒有胚胎的 2.5 dpc 假孕小鼠上練習 mNSET 技術。
3. mNSET 設計為緊貼在 Rainin Classic PR2, 0.1-2µl 或 Gilson Pipetman P2, 0.2-2µl 移液器上，用于裝載胚胎和將培養基精確測量到設備的尖。
4.我們建議使用有意識、冷靜和不激動的小鼠。這樣可以更容易地讓鼠標處于自然位置以找到并進入子宮頸。我們網站上視頻中的雌性老鼠沒有被鎮靜。
5.我們使用 CD1 小鼠，并強烈建議將這種品系用于您的假孕受體。我們建議使用體重≥26g 且至少 60 天大的小鼠。
6.胚胎應培養到囊胚階段 (e3.5)，因為該裝置將它們轉移到子宮角之一而不是輸卵管。一些最終用戶已成功使用桑椹胚。
7.選擇一種您使用過的培養基，它能讓您在胚胎孵化過程中取得最大成功。例如，使用 M2 或 KSOM 培養基并轉移 12 到 20 個胚胎。
8. mNSET 裝置只能在假孕小鼠的某些發情期和 2.5 dpc 時通過子宮頸。因此，我們強烈建議使用 2.5 dpc 假孕小鼠（在插頭脫落后）進行訓練和使用 mNSET 設備進行胚胎移植。
9.我們發現通過將鼠標放在帶有金屬絲架的籠子頂部，讓雌性保持靜止并減少蠕動相對容易，這樣她就可以抓住籠桿表面。使用 mNSET 說明 #6 中描述的保持技術，并在我們網頁上的 mNSET 視頻中進行演示：https ://paratechs.com/collections/art-devices/products/nset-device-formice#mnset-60010 -視頻。
10. 我們不推薦使用潤滑劑。您可以使用無菌水或培養基潤濕窺器，然后在插入陰道之前抖掉多余的部分。
11.將小窺器輕輕插入陰道。鼠標會先天地將窺器推出一點。輕輕將其按回原位，以便 mNSET 裝置可以穿過子宮頸并進入其中一個子宮角。
12.可選：取下小窺器，換上大窺器。如果需要，使用足夠的光源，例如鵝頸燈，并觀察子宮頸。
13.使用 NSET 尖找到并刺入子宮頸時，請耐心等待，不要施加太大壓力。這可能會導致組織損傷，并且可能會彎曲 mNSET 設備尖，使其幾乎無法使用。如果第一次嘗試插入 mNSET 的位置不正確，請輕輕地重新定位設備并重復。
14.如果在尋找宮頸開口時施加的壓力過大導致尖彎曲，則可能會導致胚胎丟失。同樣，溫和的重復嘗試與 mNSET 的成功有關。
15.當 mNSET 設備的輪轂接觸到窺器末端時，您就會知道設備已通過子宮頸正確插入子宮。
16.要排出胚胎，請將移液器柱塞按到第一檔。數到 3。不要松開柱塞。
17. 在 不松開移液管柱塞的情況下緩慢取出 mNSET 。如果在移除之前釋放柱塞，一些胚胎可能會被拉回尖。
18.使用后在顯微鏡下檢查 mNSET 尖是一種很好的做法。清晰的尖 mNSET 允許在尖內部進行可視化。
該設備專為一次性使用而設計。重復使用會用宮頸組織堵塞 mNSET 尖。重復使用可能會使導管變得柔韌，并且不再足夠堅硬以通過子宮頸。因此，可能將胚胎存放在陰道中，而不是按預期放置在子宮角中。
用于小鼠的 mNSET 設備 60010 常見問題解答
1. 我可以重復使用 mNSET 設備將胚胎移植到多只小鼠中嗎？
ParaTechs 不建議使用 mNSET 設備進行多次傳輸。來自小鼠生殖道的組織往往會堵塞導管。重復使用還會使導管變得柔韌，不再足夠堅硬以通過子宮頸，從而將胚胎存放在陰道中。當設備多次使用時，胚胎移植的成功率可能會明顯下降。
2. 我應該使用什么小鼠品系作為我的胚胎受體？
ParaTechs 推薦 CD1 或 ICR 小鼠。為獲得最佳效果，接受者的體重應≥ 26 克且年齡應超過 60 天。
3. 受體小鼠應在性交后（dpc）哪天？
我們強烈建議使用2.5 dpc 假孕小鼠進行訓練和使用 mNSET 設備進行胚胎移植。mNSET 設備有可能通過假孕小鼠 1.5 dpc 的子宮頸。然而，當時胚胎移植的成功率已證明低于使用推薦的 2.5 dpc 假孕女性。
4. 我的胚胎應該在哪個發育階段進行移植？
胚胎應該比假孕女性的生殖道處于更晚的發育階段。例如，囊胚（受精后 e3.5 天）應轉移到 2.5 dpc 假孕受體中。
5. 執行 mNSET 程序是否需要麻醉？
沒有。ParaTechs 不建議使用麻醉。可以放置一個平靜有意識的動物，以便 mNSET 裝置導管可以輕松通過子宮頸。我們網站上演示視頻中的鼠標沒有被麻醉：https : //paratechs.com/collections/art-devices/products/nset-device-for-mice#mnset-60010-videos。使用未麻醉的小鼠還可以使手術更快、更容易，同時消除麻醉的風險和壓力。1 麻醉可能有助于訓練目的，但不需要在普通條件下使用。
6. 在 mNSET 過程中我應該使用潤滑劑嗎？
不會。潤滑劑會堵塞 mNSET 導管并阻止胚胎正確放置在子宮角中。在插入之前，窺器可能會用無菌水或培養基潤濕，但這也是不必要的。如果弄濕了窺器，在將設備插入陰道之前一定要抖掉多余的水分。
7. 我無法定位和穿過子宮頸。我該怎么辦？
確保您的受體女性是 2.5 dpc 假孕。在插入 mNSET 導管之前，使用鵝頸燈檢查和定位宮頸開口，因為這將幫助您正確定位設備。在嘗試胚胎移植之前，練習穿過 2.5 dpc 假孕女性的子宮頸可能會有所幫助。
8. 我應該將多少胚胎移植到每只受體小鼠中？
對于大多數轉移，ParaTechs 建議將12-20 個胚胎轉移到每只受體小鼠。（注意：移植的最佳胚胎數量會因小鼠品系和胚胎接受的操作而異。）
9. 我進行了非手術胚胎移植，但是當我移除 mNSET 裝置時，導管彎曲了。發生了什么？
彎曲的導管可能意味著導管沒有進入子宮頸，或者您在嘗試定位子宮頸開口時施加了太大的壓力。如果導管彎曲，則胚胎不太可能沉積到小鼠的子宮角中。定位宮頸口時使用溫和的壓力很重要。
10. 我可以多次使用小鼠作為胚胎受體嗎？
ParaTechs 的研究表明，可以對女性接受者執行多個 mNSET 程序并獲得多達三窩。然而，第一胎后妊娠率和胚胎移植效率有所下降。
11. mNSET 設備可以用于人工授精 (AI) 嗎？
是的。mNSET 設備也可用于將精z輸送給受體雌性小鼠以促進 AI。2 請參閱下面由 Stone 等人撰寫的文章。(2015)。
12. mNSET設備是否有其他應用？
是的。mNSET 設備還可用作有效轉移物質以用于子宮生理學和細菌感染研究的新方法
