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Fluorogenic Substrates
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基于 ANSN 的熒光底物
的一般結(jié)構(gòu)圖解了基于6-氨基-1-萘磺酰胺 (ANSN) 熒光底物的一般結(jié)構(gòu)。在本化合物家族中，R 1 是三肽，其COOH-末端殘基通常是精氨酸。R2和R3可以是氫、烷基、芳基或環(huán)烷基。虛線表示各種絲氨酸蛋白酶水解的位點(diǎn)。
含有熒光報(bào)告基團(tuán) 6-amino-1-naphthalene-sulfonamide (ANSN) 的底物是用于監(jiān)測各種絲氨酸蛋白酶的酶活性的有用化合物 (1-12)。在此類化合物中，ANSN 報(bào)告基團(tuán)與短的三肽序列相連（在 R1 位置）。肽序列旨在優(yōu)化酶和底物之間的相互作用。可以添加到 R2 和 R3 位置的其他成分反映了 P' 亞位點(diǎn)位置的變化，并且通常會(huì)影響底物的動(dòng)力學(xué)參數(shù)。作為有效底物的化合物在三肽和 ANSN 基團(tuán)之間水解。一旦從肽部分切下，ANSN 基團(tuán)的相對熒光就會(huì)增加約 1000 倍。
下頁確定的動(dòng)力學(xué)特性將有助于選擇合適的底物。已證明 ANSN 底物對因子 VIIa (1-5,7,9,10,12) 的分析特別有用。盡管單獨(dú)的因子 VIIa 的底物水解速率相對較慢，但當(dāng)組織因子加入分析系統(tǒng)時(shí)，幾種化合物（例如化合物 SN-17a）的 kcat 會(huì)發(fā)生很大變化。
使用信息：
基于 ANSN 的底物以 DMSO 中的 10mM 儲(chǔ)備溶液形式提供，通常可用于分析 400 nM 至低至 50pM 濃度范圍內(nèi)的酶。ANSN 底物通常以 50 到 100 µM 的最終濃度使用，并且可以在大多數(shù)生理緩沖液（即 TBS、HBS、PBS 等）中稀釋到該最終濃度。反應(yīng)（熒光的相對變化）可以使用標(biāo)準(zhǔn)熒光計(jì)或熒光讀板器進(jìn)行監(jiān)測。動(dòng)力學(xué)或終點(diǎn)模式可與設(shè)置在以下波長（激發(fā)=352nm，發(fā)射=470nm）的儀器一起使用。通過在發(fā)射光束中使用 390 至 450 nm 長通截止濾波器，可以最大限度地減少光偽影。
下表列出了每種底物的動(dòng)力學(xué)特性，表下方列出了期刊參考文獻(xiàn)列表作為使用示例。
DMSO 中的儲(chǔ)備底物溶液應(yīng)在 4°C 或更低的溫度下冷凍儲(chǔ)存，并應(yīng)避光。在這些條件下，化合物將保持穩(wěn)定超過一年。
**下表的關(guān)鍵字：K m = µM；k貓= s -1 ; k cat /K m = M -1 s -1 x 10 -5 ; ND=未確定
結(jié)構(gòu) D-AFK-ANSNH-iC 4 H 9 .2HBr 對...有用 對纖溶酶有用 公式 DMSO 專注 10 毫米 動(dòng)力學(xué)性質(zhì) Ⅱa VIIa VIIa/TF Xa 夏 個(gè)人電腦 多巴胺 纖溶酶 ?中號 ND ND ND ND ND ND ND 130 K貓 ND ND ND ND ND ND ND 3.7 K貓/K M ND ND ND ND ND ND ND 0.28 結(jié)構(gòu) Mes-D-LGR-ANSN(C 2 H 5 ) 2 對...有用 對因子 Xa 有用 公式 DMSO 專注 10 毫米 動(dòng)力學(xué)性質(zhì) Ⅱa VIIa VIIa/TF Xa 夏 個(gè)人電腦 多巴胺 纖溶酶 ?中號 31 180 200 125 580 113 ND ND K貓 0.63 0.007 0.79 36 15 0.055 ND ND K貓/K M 0.2 ND 0.04 2.9 0.26 0.005 ND ND 結(jié)構(gòu) D-LPR-ANSNH-C 3 H 7 • 2 HCl 對...有用 對因子 XIa 有用 公式 DMSO 專注 10 毫米 動(dòng)力學(xué)性質(zhì) Ⅱa VIIa VIIa/TF Xa 夏 個(gè)人電腦 多巴胺 纖溶酶 ?中號 0.5 300 300 171 75 45 98 ND K貓 19 0.07 4.5 3.3 53 52 0.31 ND K貓/K M 380 0.002 0.15 0.19 7.1 12 0.03 ND 結(jié)構(gòu) D-FPR-ANSNH-C 6 H 11 • 2 HCl 對...有用 對凝血酶和 VIIa 有用 公式 DMSO 專注 10 毫米 動(dòng)力學(xué)性質(zhì) Ⅱa VIIa VIIa/TF Xa 夏 個(gè)人電腦 多巴胺 纖溶酶 ?中號 0.4 150 330 150 ND 7.8 36 ND K貓 17 0.05 8.4 0.32 ND 6.6 0.074 ND K貓/K M 430 0.004 0.25 0.02 ND 8.6 0.02 ND 結(jié)構(gòu) D-FPR-ANSNH-C 4 H 9 • 2 HCl 對...有用 對因子 VIIa 有用 公式 DMSO 專注 10 毫米 動(dòng)力學(xué)性質(zhì) Ⅱa VIIa VIIa/TF Xa 夏 個(gè)人電腦 多巴胺 纖溶酶 ?中號 ND 186 102 ND ND 53 ND ND K貓 ND 0.11 2.7 ND ND 21 ND ND K貓/K M ND 0.006 0.26 ND ND 4 ND ND 結(jié)構(gòu) Boc-L-(pF)FPR-ANSNH-C 2 H 5 對...有用 對 tPA 有用 公式 DMSO 專注 10 毫米 動(dòng)力學(xué)性質(zhì) Ⅱa VIIa VIIa/TF Xa 夏 個(gè)人電腦 多巴胺 纖溶酶 ?中號 3.7 50 217 ND ND ND 71 ND K貓 44 0.008 0.88 ND ND ND 1.03 ND K貓/K M 120 0.002 0.04 ND ND ND 0.15 ND 結(jié)構(gòu) Boc-L-FPR-ANSNH-C 2 H 5 對...有用 對凝血酶有用 公式 DMSO 專注 10 毫米 動(dòng)力學(xué)性質(zhì) Ⅱa VIIa VIIa/TF Xa 夏 個(gè)人電腦 多巴胺 纖溶酶 ?中號 17 ND ND 100 ND 540 47 ND K貓 58 ND ND 0.31 ND 2.2 0.011 ND K貓/K M 34 ND ND 0.003 ND 0.04 0.002 ND 結(jié)構(gòu) L-EGR-ANSNH-C 3 H 7 • 2 HBr 對...有用 對因子 XIa 有用 公式 DMSO 專注 10 毫米 動(dòng)力學(xué)性質(zhì) Ⅱa VIIa VIIa/TF Xa 夏 個(gè)人電腦 多巴胺 纖溶酶 ?中號 100 ND ND 110 225 440 ND ND K貓 2.5 ND ND 0.2 82 17 ND ND K貓/K M 0.25 ND ND 0.02 3.6 0.39 ND ND 結(jié)構(gòu) BOC-D-VLR-ANSNH-C 4 H 9 對...有用 對 aPC 有用 公式 DMSO 專注 10 毫米 動(dòng)力學(xué)性質(zhì) Ⅱa VIIa VIIa/TF Xa 夏 個(gè)人電腦 多巴胺 纖溶酶 ?中號 19 42 170 19 ND 3.9 ND ND K貓 0.055 0.007 1.6 0.055 ND 2.1 ND ND K貓/K M 0.03 0.002 0.09 0.03 ND 5.2 ND ND 結(jié)構(gòu) D-VPR-ANSNH-C 4 H 9 • 2 HCl 對...有用 對凝血酶和 aPC 有用 公式 DMSO 專注 10 毫米 動(dòng)力學(xué)性質(zhì) Ⅱa VIIa VIIa/TF Xa 夏 個(gè)人電腦 多巴胺 纖溶酶 ?中號 2 89 52 160 520 54 110 ND K貓 110 0.019 0.76 3.3 92 72 0.71 ND K貓/K M 550 0.002 0.14 0.21 1.8 13 0.065 ND
