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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司
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encapsula IMD-1011說(shuō)明書(shū)
Immunodox®-Folate (PEGylated)
SKU# IMD-1011
| SIZE | PRICE |
|---|---|
| 2-ml | $850.00 |
| 5-ml | $1,900.00 |
描述
在過(guò)去的五十年中，已經(jīng)使用各種類(lèi)型的化學(xué)方法將諸如抗體，肽，蛋白質(zhì)或其他反應(yīng)性配體的分子綴合到脂質(zhì)體的表面。通常，可以通過(guò)N端，C端或可利用的硫（例如， Fab'級(jí)分或硫醇化抗體）來(lái)實(shí)現(xiàn)綴合。并非所有化學(xué)方法都具有相同的結(jié)合收率和效率，經(jīng)常要生產(chǎn)生物相容性批次可能是一個(gè)挑戰(zhàn)。
葉酸結(jié)合蛋白（FBP）是一種內(nèi)源性蛋白，對(duì)葉酸具有很高的親和力。抗體可以通過(guò)FBP標(biāo)記，免疫脂質(zhì)體可以通過(guò)FBP與脂質(zhì)體表面的葉酸脂質(zhì)之間的非共價(jià)和高親和力相互作用形成。在這種方法中，已經(jīng)通過(guò)硫醚鍵與FBP共價(jià)連接的抗體與葉酸衍生物脂質(zhì)體偶聯(lián)。具有相對(duì)較低的分子量（MW?40 kDa）和單個(gè)結(jié)合位點(diǎn)可防止脂質(zhì)體交聯(lián)。
配方信息
葉酸Immunodox®（聚乙二醇化）
| 脂質(zhì)組成 | 濃度（mg / ml） | 濃度（mM） | 摩爾比百分比 |
|---|---|---|---|
| 氫化大豆PC | 9.58 | 12.22 | 57 |
| 膽固醇 | 3.19 | 8.25 | 38 |
| DSPE-聚乙二醇（2000） | 2.7 | 0.96 | 4.5 |
DSPE-PEG（2000）-葉酸鹽 | 0.39 | 0.12 | 0.5 |
| 全部的 | 15.86毫克/毫升 | 21.55毫米 | 100 |
| 緩沖液，脂質(zhì)體大小和封裝的藥物濃度 | 規(guī)格 |
|---|---|
| 內(nèi)部緩沖區(qū) | 硫酸銨 |
| 外部緩沖區(qū) | 磷酸鹽緩沖溶液 |
| pH值 | 7.4 |
| 脂質(zhì)體大小 | 100納米 |
| 封裝的阿霉素 | 2毫克/毫升（3.45毫米） |
結(jié)合方案
材料和設(shè)備
為了將用FBP標(biāo)記的抗體或蛋白質(zhì)與Immunodox®-葉酸脂質(zhì)體偶聯(lián)，您需要：
- 建議使用實(shí)驗(yàn)室渦旋混合器。
- 透析需要實(shí)驗(yàn)室磁力攪拌器。
- 具有適當(dāng)MWCO的Float-A-Lyzer®可以輕松清除游離和非結(jié)合蛋白/肽/配體的脂質(zhì)體結(jié)合配體。您需要確保MWCO低于1,000,000道爾頓。在1,000,000道爾頓時(shí)，透析膜上的孔徑接近100 nm，因此可以透析您的脂質(zhì)體。您不能盲目使用透析盒。在使用離心柱或透析盒之前，請(qǐng)先了解該技術(shù)。如果未使用正確的MWCO，則可能會(huì)失去全部準(zhǔn)備。對(duì)于此協(xié)議，我們建議MWCO為300,000道爾頓。
制備方法
- 葉酸中的總脂質(zhì)濃度為21.55 mM。脂質(zhì)體中0.5％mol的脂質(zhì)包含PEG-葉酸酯基團(tuán)，并且只有一半暴露于脂質(zhì)體的外部，這等于0.053 mM的反應(yīng)性結(jié)合脂質(zhì)。對(duì)于2ml體積的脂質(zhì)體，其等于1.08×10 -7 mol，對(duì)于5ml體積的脂質(zhì)體，其等于2.69×10 -7 mol的PEG-葉酸酯。 將FBP標(biāo)記的抗體與PEG-葉酸酯脂質(zhì)的摩爾比添加為1:20。
- 在室溫下將Immunodox®-Folate與抗體-FBP一起孵育1小時(shí)。
- 透析除去非結(jié)合的抗體，蛋白質(zhì)，肽或配體。與尺寸排阻色譜柱相比，我們更喜歡透析。透析的過(guò)程要慢得多，但是從非結(jié)合蛋白/多肽/配體中清除了制備物后，免疫脂質(zhì)體的損失將降低。旋轉(zhuǎn)柱要快得多，但您很容易損失掉旋轉(zhuǎn)柱上50％以上的脂質(zhì)體。我們建議使用Spectrum Labs的Float-A-Lyzer®透析盒。您需要根據(jù)蛋白質(zhì)，配體，抗體或抗體片段的分子量選擇合適的MWCO盒。 筆記：如果決定使用透析盒，則需要確保MWCO低于1,000,000道爾頓。在1,000,000道爾頓時(shí)，透析膜上的孔徑接近100 nm，因此可以透析您的脂質(zhì)體。您不能盲目使用透析盒和離心柱。它們有各種尺寸，您需要明智地選擇正確的尺寸。在1升pH 7.4的PBS中透析免疫脂質(zhì)體溶液8小時(shí)。用新鮮的1升PBS更換透析緩沖液，再透析8小時(shí)。完成此步驟后，即可使用旋轉(zhuǎn)柱或透析盒來(lái)使用已清理的免疫脂質(zhì)體。如果未使用正確的MWCO，則可能會(huì)失去全部準(zhǔn)備。
脂質(zhì)體顆粒計(jì)算器
Immunodox®脂質(zhì)體是單層的，尺寸為100 nm。脂質(zhì)體的摩爾濃度為21.55mM。通過(guò)具有 脂質(zhì)體直徑（nm）和脂質(zhì)濃度（µM），您可以計(jì)算出一個(gè)脂質(zhì)體中脂質(zhì)的總數(shù)和一毫升脂質(zhì)體溶液中脂質(zhì)體的數(shù)目。要使用計(jì)算器，請(qǐng)單擊 此處。
技術(shù)說(shuō)明
- 阿霉素是具有λex 470 nm和λem 585 nm的熒光分子。如果您在抗體或配體上使用熒光標(biāo)簽，則需要確保它們不會(huì)互相干擾。
- 請(qǐng)記住，表面含有葉酸的脂質(zhì)體的主要用途是靶向細(xì)胞上的葉酸受體。使用標(biāo)記有FBP的抗體/蛋白質(zhì)或配體制備免疫脂質(zhì)體是非常利基的應(yīng)用。
- 由于暴露于低pH下葉酸和FBP之間的親和力降低，免疫脂質(zhì)體在暴露于內(nèi)體小室的低pH環(huán)境后通過(guò)內(nèi)吞作用而被內(nèi)在化后可能會(huì)解體。通過(guò)允許將內(nèi)化的脂質(zhì)體分選到適當(dāng)?shù)膩喖?xì)胞區(qū)室和/或促進(jìn)藥物分子從脂質(zhì)體的細(xì)胞內(nèi)釋放，這種內(nèi)化觸發(fā)的解偶聯(lián)可能有益于在細(xì)胞水平上遞送脂質(zhì)體藥物。
- 可以使用尺寸排阻旋轉(zhuǎn)柱（例如Sepharose®CL-4B）代替Float-A-Lyzer®透析盒。但是，在純化過(guò)程中，大量的脂質(zhì)體會(huì)粘在色譜柱上，因此我們強(qiáng)烈建議使用透析法，而不是使用大小排他的珠子。
- 如果您使用的是疏水的配體或肽，則建議將其溶解在DMSO或DMF中，然后向其中添加緩沖液。建議溶液中使用的DMSO或DMF量不超過(guò)5％。DMF和DMSO均與脂質(zhì)體相容，并且也可與水混溶。其他有機(jī)溶劑（例如乙醇和氯方）與脂質(zhì)體不相容，會(huì)導(dǎo)致脂質(zhì)體裂解。如果終使用DMSO或DMF，那么在完成偶聯(lián)反應(yīng)后，您需要從脂質(zhì)體中除去DMSO和DMF。為此，您需要使用由再生纖維素膜制成的透析盒。注意：并非所有膜都與DMF和DMSO兼容。我們建議使用Slide-A-Lyzer™MINI透析設(shè)備 由ThermoFisher生產(chǎn)的再生纖維素膜制成的MWCO為2K。去除DMSO或DMF后，您可以使用Float-A-Lyzer®透析設(shè)備進(jìn)行清理準(zhǔn)備的后一步。
- 脂質(zhì)體應(yīng)保持在4°C且切勿冷凍。
