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NanoBRET靶標參與細胞內激酶測定服務

2021-2-19  閱讀(2953)

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reactionbiology的NanoBRET靶標參與細胞內激酶測定服務

NanoBRET靶標參與細胞內激酶測定服務

Reaction Biology正在與Promega合作,使用NanoBRET技術提供目標參與分析。NanoBRET靶標參與細胞內激酶測定法可測量完整細胞中特定靶標激酶的化合物結合,是除細胞磷酸化測定法以外我們提供的兩種基于細胞的激酶測定法之一。

NanoBRET分析采用能量轉移技術,旨在測量活細胞中的分子接近性。NanoBRET靶標參與細胞內激酶測定法通過競爭性置換NanoBRET示蹤劑來測定測試化合物的表觀親和力,該示蹤劑可逆地結合到細胞中的NanoLuc熒光素酶激酶融合構建體上。細胞內靶標的結合和選擇性在生理上是相關的,并且對于化合物的藥理機制是至關重要的。生物化學和生物物理分析可以在體外識別激酶抑制劑,而NanoBRET分析則是確定化合物與細胞中靶激酶直接相互作用的強大工具。

  • 該測定提供化合物與激酶靶標結合親和力的實時數據,包括占用時間
  • 完整的細胞就離子和ATP的濃度,pH或輔因子而言,為化合物激酶的相互作用提供了一個相關的環境。另外,為了在細胞內部發揮作用,化合物必須克服細胞膜。
  • 適用于高通量篩選
 

NanoBRET檢測原理

該測定法是一種化合物競爭測定法,它依賴于熒光素酶標記的激酶和熒光示蹤劑之間的生物發光共振能量轉移(BRET)。定量和特異性是NanoBRET系統的關鍵屬性。

 

分析細節

用于DDR1的nanobret激酶測定法用于參考抑制劑IC50數據

實例研究:ATP競爭性酪氨酸激酶抑制劑對DDR1的抑制作用。

將瞬時表達NanoLuc-DDR1融合載體的HEK293細胞接種到384孔板中,并用示蹤劑K-4和化合物處理1小時。BRET信號在EnVision 2104多標記酶標儀上測量。

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