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上海起發(fā)實(shí)驗(yàn)試劑有限公司
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cytoskeleton BK165-S說(shuō)明書(shū)
新的Signal-Seeker™：PTM檢測(cè)試劑盒，抗體和試劑
| 簡(jiǎn)單 全面的套件可大限度地縮短優(yōu)化時(shí)間，同時(shí)大化PTM檢測(cè) 質(zhì)量 的靈敏度和度，可以自信地識(shí)別低豐度的PTM 積分 使用相同的系統(tǒng)研究多個(gè)PTM
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新的Signal-Seeker™SUMOylation 1檢測(cè)試劑盒（10種檢測(cè)）
量
10種檢測(cè)方法（Cat。＃BK165-S）
Signal-Seeker™系列產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)旨在簡(jiǎn)化專家和非專業(yè)人士對(duì)關(guān)鍵調(diào)節(jié)蛋白修飾的分析。全面的Signal-Seeker™試劑盒提供親和珠系統(tǒng)，可從任何給定的細(xì)胞或組織裂解液中分離和富集修飾的蛋白質(zhì)。然后使用針對(duì)靶蛋白的抗體通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)印跡程序分析富集的蛋白質(zhì)群體。
產(chǎn)品用途包括
- 調(diào)查瞬態(tài)監(jiān)管機(jī)制
- 測(cè)量多種途徑成員蛋白的信號(hào)傳導(dǎo)事件
- 發(fā)現(xiàn)您感興趣的蛋白質(zhì)的新修改
- 深入了解監(jiān)管機(jī)制
- 測(cè)量?jī)?nèi)源性或瞬時(shí)表達(dá)的蛋白質(zhì)信號(hào)傳導(dǎo)事件
?
套件內(nèi)容
SUMOylation 1試劑盒包含以下組分：
| 裂解和蛋白質(zhì)定量步驟 | IP和預(yù)清除步驟 | 洗步驟 | 洗脫步驟 | 西部一步 |
BlastR™裂解緩沖液 BlastR™稀釋緩沖液 BlastR™過(guò)濾器 蛋白酶抑制劑雞尾酒 去SUMO化抑制劑雞尾酒 Precision Red™蛋白質(zhì)分析試劑 | SUMOylation 1 Affinity Beads IP控制珠
| BlastR™洗滌緩沖液
| 旋轉(zhuǎn)列 珠子洗脫緩沖液
| 化學(xué)發(fā)光試劑A. 化學(xué)發(fā)光試劑B. 抗SUMO1抗體
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示例結(jié)果
這些套件有很多應(yīng)用，這里我們描述一個(gè)有趣的例子：
應(yīng)用1：研究重要的SUMOylation 1事件
與舊的SUMO1工具相比，使用Signal-Seeker™SUMOylation 1檢測(cè)試劑盒免疫沉淀總SUMO1譜 （A）使用BlastR裂解和過(guò)濾系統(tǒng)獲得HAP1野生型（WT）或SUMO1敲除（KO）裂解物。將1mg每種裂解物與40mg每種SUMO1親和試劑一起溫育：ASM11-珠（Cytoskeleton），21C7（Invitrogen純化的），21C7（DSHB-上清液），D11-珠（Santa Cruz）和綴合的SUMO1 IgG對(duì)照珠。 （CIG03）。用蛋白G瓊脂糖珠捕獲21C7抗體以富集SUMO-1修飾的蛋白。通過(guò)SDS-PAGE分離樣品并轉(zhuǎn)移至PVDF。使用1：5000的ASM01（Cytoskeleton）抗體和5％牛奶中1：1000的小鼠Trubelot Ultra-HRP二抗，通過(guò)蛋白質(zhì)印跡分析富集的SUMO1樣品。Trueblot secondary用于小化21C7樣品的重鏈和輕鏈檢測(cè)。
（B）：使用ASM11進(jìn)行IP，如圖1A所示。SUMO1修飾的蛋白質(zhì)用ASM01 1：5000顯示，抗小鼠以1：20,000顯示，以突出在64-30kDa范圍內(nèi)SUMO化蛋白質(zhì)的分布，當(dāng)使用未綴合的抗體時(shí)，可能被重鏈和輕鏈干擾掩蓋。 IP。 |
與舊的SUMO1工具相比，使用Signal-Seeker™SUMOylation 1檢測(cè)試劑盒免疫沉淀SUMO1修飾的靶蛋白
使用BlastR裂解和過(guò)濾系統(tǒng)獲得HAP1野生型（WT）或SUMO1敲除（KO）裂解物。1毫克每裂解物與40孵育米 ASM11珠（細(xì)胞骨架），21C7（DSHB上清液），和共軛SUMO1 IgG對(duì)照珠（CIG03）：g各自SUMO1親和試劑的。用蛋白G瓊脂糖珠捕獲21C7抗體以富集SUMO-1修飾的蛋白。通過(guò)SDS-PAGE分離樣品并轉(zhuǎn)移至PVDF。靶蛋白：通過(guò)蛋白質(zhì)印跡分析（A）TFII-I，RanGAP1和（B）schmd1的SUMO1修飾形式。抗兔-HRP標(biāo)記的第二抗體以1：10,000使用。所有三種一抗均為兔多克隆抗體，不應(yīng)結(jié)合來(lái)自IP抗體的重鏈和輕鏈片段。
在這一研究領(lǐng)域可以嘗試的其他實(shí)驗(yàn)包括：
•參與調(diào)節(jié)靶蛋白的SUMOylating和去SUMOylating酶的藥理學(xué)研究。
•在各種不同的生長(zhǎng)因子或藥物治療下研究SUMO化。
•檢查SUMOylated靶蛋白與其下游效應(yīng)子的相互作用。
•檢查SUMOylation 1和其他PTM之間對(duì)目標(biāo)蛋白的串?dāng)_。
