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Celltechgen CTG-MGD4766說明書
Detect Kit
· Model: CTG-MGD4766
細節(jié)：
- 檢測套件
貨號：CTG-MGD4766
試劑盒組分：
2毫升單克隆抗體 - ，R-PE共軛。
2毫升Anti-R-PE磁珠。
1 ml Bead釋放試劑和1 ml Stop Buffer（可選）
描述
該套件用于隔離和檢測 - ？使用磁珠磁性標記的細胞。首先，通過與R-PE和抗R-PE磁珠綴合的單克隆抗體標記細胞，在磁柱上正選擇- +細胞，收集用于進一步的流式細胞術(shù)分析。珠子釋放試劑和終止緩沖劑可用于從磁珠中釋放具有抗體-R-PE的細胞。
目標特征
符號： -
基因編號：729816
Uniprot條目：Q04683
蛋白質(zhì)名稱：CXC趨化因子受體5型（CXC-R5）（CXCR-5）（伯基特淋巴瘤受體1同源物）（CD抗原CD185）
生物：Mus musculus（Mouse）
目標功能
容量
1 X 10 9個細胞
公式
所有組分均以含有穩(wěn)定劑和0.05％sodium azide的緩沖液供應(yīng)。
存儲和使用
在2-8°C的溫度下避光保存。不要凍結(jié)。到期日期顯示在樣品瓶標簽上。該產(chǎn)品僅供研究使用，不適用于診斷程序。
一般議定書
開發(fā)檢測試劑盒以用特異性抗原分離和檢測靶細胞。篩選程序通過用針對特異性抗原的單克隆抗體直接磁性標記細胞，與R-PE和抗R-PE磁珠綴合，然后將標記的細胞保留在磁柱上，并且靶細胞釋放并收集用于進一步的流式細胞術(shù)分析。
1.樣品制備
· 當使用抗凝外周血或血沉棕黃層時，應(yīng)通過密度梯度離心分離外周血單核細胞（PBMC）。
· 為了在密度梯度分離后除去血小板，將細胞沉淀重懸于緩沖液中，并在20℃下以200×g離心10-15分鐘。小心吸出上清液。重復(fù)洗滌步驟。
· 使用組織或裂解的血液時，使用標準方法制備單細胞懸液。
· 死細胞可以非特異性結(jié)合磁珠。為了去除死細胞，我們建議使用密度梯度離心或死細胞去除試劑盒。
· 保持細胞冷卻，并使用預(yù)先冷卻的溶液。
2.磁性標簽
· 以下給出的磁性標簽卷多可達10個？總細胞。工作時少于10？細胞，使用與指示相同的體積。使用較高的細胞數(shù)時，相應(yīng)地擴大所有試劑體積和總體積。
· 應(yīng)滴定初級染料綴合的抗體以確定宜染色稀釋度。染色不應(yīng)該增加陰性群體的熒光強度。
1） 計算細胞數(shù)量。
2） 以300×g離心細胞懸浮液10分鐘。*吸出上清液。
3） 每10 7個總細胞在80μL緩沖液中重懸細胞沉淀。
4） 加入20μl初級PE-綴合的抗體并充分混合，在2-8℃黑暗中孵育10分鐘。
5） 每10小時加入1-2 mL緩沖液，清洗細胞以去除未結(jié)合的一抗。將細胞以300×g離心10分鐘。
6） *吸出上清液，每10 7個總細胞將細胞重懸于80μL緩沖液中。
7） 每10加入20μL抗PE磁珠？總細胞。
9）充分混合，在2-8℃下孵育15分鐘。
10）每10升加入1-2 mL緩沖液洗滌細胞。將細胞以300×g離心10分鐘，*吸出上清液。
11）重新懸掛10？細胞在500μL緩沖液中。注意：對于更高的單元格數(shù)，請相應(yīng)地擴大緩沖區(qū)容量。
12）繼續(xù)進行磁力分離。
3.用于檢測的靶細胞的陽性選擇
1）將色譜柱放在合適的分離器的磁場中。
2）用適量緩沖液沖洗，準備色譜柱。
3）將細胞懸浮液施加到柱上。
4）收集未標記的細胞，用適量的緩沖液通過并洗滌柱子。執(zhí)行洗滌步驟三次。
5）從分離器中取出色譜柱并將其放在合適的收集管上。
6）移取適量的緩沖液到柱上并釋放靶細胞用于進一步的流式細胞術(shù)分析。
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