對于分光光度計我們應(yīng)用比較廣泛，但是了解甚少，在此為大家介紹一下分光光度計的有關(guān)知識，希望能夠更好的了解以及應(yīng)用。

分光光度計原理：是利用分光光度法通過測定被測物質(zhì)在特定波長處或一定波長范圍內(nèi)光的吸收度對該物質(zhì)進(jìn)行定性和定量分析。

分光光度計主要組成由光源、單色器、樣品室、檢測器、信號處理器和顯示與存儲系統(tǒng)組成。

1.分光光度計按照波長及應(yīng)用領(lǐng)域的不同可以分為：可見光分光光度計，紫外分光光度計，紅外分光光度計，熒光分光光度計，原子吸收分光光度計。

可見光分光光度計測定波長范圍為400760 nm的可見光區(qū)
紫外分光光度計測定波長范圍為200400nm的紫外光區(qū)
紅外分光光度計測定波長范圍為大于760nm的紅外光區(qū)
熒光分光光度計用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜
原子吸收分光光度計光源發(fā)出被測的特征光譜輻射被經(jīng)過原子化器后的樣品蒸氣中的待測元素基態(tài)原子所吸收通過測定特征輻射被吸收的大小來求出被測元素的含量。

不同種類的分光光度計的基本原理相似都是利用一個可以產(chǎn)生多個波長的光源通過系列分光裝置從而產(chǎn)生特定波長的光源。光源透過測試的樣品后部分光源被吸收通過測量樣品的吸光值經(jīng)過計算可以轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。 

2.分光光度計按自動化程度分類可分:為手動、半自動、自動分光光度計。 

3.分光光度計按軟件可分為:帶掃描、不帶掃描。

分光光度計較為常使用的就是紫外可見分光光度計。

根據(jù)紫外可見分光光度計的儀器結(jié)構(gòu)可以分為三類：單光束分光光度計、雙光束分光光度計和雙波長分光光度計。

1、單光束分光光度計

單光束是指從光源今發(fā)出的光，經(jīng)過單色器等—系列光學(xué)元件，通過吸收池，較為后照在檢測器上時，始終為一束光。它只官一束單色光(光束只能交替通過參比溶液、樣品溶液)，一只比色皿，一只光電轉(zhuǎn)換器。工作時，一條光路，先通過多比溶液，再通過試樣溶液進(jìn)行光強(qiáng)度的測旦。　　

單光束分光光度計的特點是結(jié)構(gòu)簡單、價格低，主要適用于做定量分析，測量結(jié)果受電源的波動影響較大，容易給測量結(jié)果帶來較大的誤差。所以，它們在位灼上受到限制。一般來講，要求較高的制藥行業(yè)、質(zhì)量檢驗行加等不適宜使用單光束紫外可見分光光度訃。

2、雙光束分光光度計

雙光束分光光度汁就是有兩束單色光的紫外可見分光光度計。其光路設(shè)計基本上與單光束分光光度計相似。區(qū)別是在單色器與吸收弛之間加了一個切光器，其作用是以一定的頻率把一個光束交替分為強(qiáng)度相等的兩柬光，使一路通過參比溶液，另一路通過樣品溶液。然后由檢測器交替接收參比信號和樣品信號。接收的光信號轉(zhuǎn)變成電信號后，由前置放大器放大，并進(jìn)一步解調(diào)、放大、補(bǔ)償?shù)龋^為后由顯示系統(tǒng)顯示。

3.雙波長分光光度計采用兩個單色器，可以同時得到兩柬波長不同的單色光，其光路. 光源發(fā)出的光被兩個單色器分別分離出波長為4：和4z的單色光，通過切光器，將兩束光以一定的時間間隔交替照射到裝有樣品試液的同一個吸收池，由檢測器顯示出試液在波長4?和42的透射比或吸光度。雙波長分光光度計不僅能測量高濃度試樣、多組分混合試樣，而義測定混濁樣品時比單波長測定更靈敏、更有選擇性。雙波長測定時，兩個波長的光通過同一吸收池，pJ以消除因吸收他的參數(shù)不同、位置不同、污垢以及制備參比溶液等帶來的誤差，從而可以顯著地提高測定的準(zhǔn)確度。

單光束分光光度計：由一束經(jīng)過單色器的光，輪流通過參比溶液和樣品溶液，以進(jìn)行光強(qiáng)度測量，主要適于做定量分析。

雙光束分光光度計：以兩束光一束通過樣品、另一束通過參考溶液的方式來分析樣品的分光光度計。這種方式可以克服光源不穩(wěn)定性、某些雜質(zhì)干擾因素等影響，還可以檢測樣品隨時間的變化等。 

雙光束分光光度計操作規(guī)程

1.接通電源，打開雙光束分光光度計開關(guān)，掀開樣品室暗箱蓋，預(yù)熱10分鐘。

2.將靈敏度開關(guān)調(diào)至“1”檔（若零點調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”時，需選用較。）

3.根據(jù)所需波長轉(zhuǎn)動波長選擇鈕。

4.將空白液及測定液分別倒入比色杯3/4處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內(nèi)，使空白管對準(zhǔn)光路。

5.在暗箱蓋開啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點調(diào)節(jié)器，使讀數(shù)盤指針指向t=0處。

6.蓋上暗箱蓋，調(diào)節(jié)“100”調(diào)節(jié)器，使空白管的t=100，指針穩(wěn)定后逐步拉出樣品滑竿，分別讀出測定管的光密度值，并記錄。

7.比色完畢，關(guān)上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。

【應(yīng)用范圍】

可廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)、化工、制藥、質(zhì)量檢驗、環(huán)境保護(hù)等方面

【注意事項】

為了防止光電管疲勞，不測定時必須將試樣室蓋打開，使光路切斷，以延長光電管的使用壽命。

取拿比色皿時，手指只能捏住比色皿的毛玻璃面，而不能碰比色皿的光學(xué)表面。

比色皿不能用堿溶液或氧化性強(qiáng)的洗滌液洗滌，也不能用毛刷清洗。

比色皿外壁附著的水或溶液應(yīng)用擦鏡紙或細(xì)而軟的吸水紙吸干，不要擦拭，以免損傷它的光學(xué)表面。

分光光度計已經(jīng)成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器，應(yīng)用也是比較廣泛。在此這里介紹的分光光度計的知識是由上海旦鼎貿(mào)易有限公司整理編輯，如有需要轉(zhuǎn)載敬請說明，謝謝！