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中級(jí)會(huì)員 | 第15年

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PCR儀循環(huán)擴(kuò)增儀的工作原理

時(shí)間:2018/12/17閱讀:2210
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PCR 擴(kuò)增的步驟

首先將模板 DNA 置于 92℃ -96℃,進(jìn)行變性(denaturation)處理,使 dsDNA 在高溫下解鏈成為 ssDNA ,且熱變性不改變其化學(xué)性質(zhì);

然后退火(annealing) ,將溫度降至 37℃ -72℃,使引物與模板的互補(bǔ)區(qū)相結(jié)合;

然后,在 72℃ 條件下, DNA 聚合酶將 dNTP 連續(xù)加到引物的 3'-OH 端,合成 DNA ,這個(gè)步驟稱為延伸(extension)。

這三個(gè)熱反應(yīng)過(guò)程的重復(fù)稱為一個(gè)循環(huán),經(jīng)過(guò) 20-40 個(gè)循環(huán)可擴(kuò)增得到大量位于兩條引物之間序列的 DNA 片段。

基本要素與DNA復(fù)制的基本要素是一致的。待拷貝的 DNA 稱為模板,它可以是雙鏈 DNA 也可是單鏈DNA,結(jié)果擴(kuò)增得到的產(chǎn)物是雙鏈狀態(tài)的。引物是 DNA 復(fù)制的先鋒,就象結(jié)晶過(guò)程中的晶核,引導(dǎo) DNA 的合成。在 PCR 擴(kuò)增中一般使用合成的寡核苷酸作引物。DNA 聚合酶是 DNA 復(fù)制的動(dòng)力,在 dNTP 等底物存在時(shí)在引物的引導(dǎo)下沿著模板 DNA 合成互補(bǔ)的 DNA 鏈。

以上是PCR儀的工作原理,上海旦鼎(damking)為您講解,希望對(duì)您有幫助。

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