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ELISA試劑盒功能研究
點(diǎn)擊次數(shù)：813 發(fā)布時間：2016-10-21
ELISA試劑盒本研究以2，3-二氫-2，2-二甲基-7-苯并呋喃氯甲酸酯為基礎(chǔ)合成了克百威的兩種半抗原，6—[[(2，3-二氫-2，2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]已酸(BFNH)和4—[[(2，3-二氫-2，2-二甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]丁酸(BFNB)。 用合成的克百威免疫原免疫兔子后獲得價、高特異性的抗克百威多克隆抗血清，用間接ELISA測定效價為1：16000～1：128000，純化抗體效價為1：500000～1：4000000。并選擇由BFNB-BSA免疫兔子所得的一種純化抗體與辣根過氧化物酶偶聯(lián)制備成酶標(biāo)抗體，同時了測定了酶標(biāo)抗體的活性，效價為1：4000。所得克百威多抗血清與丁硫克百威的交叉反應(yīng)率6.19%，與呋喃酚的交叉反應(yīng)率為4.00%，與供試的其它5種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的交叉反應(yīng)率均小于0.44%，ELISA試劑盒對于三種有機(jī)磷農(nóng)藥的交叉反應(yīng)率均低于0.12%。 同時，根據(jù)抗體抗原的特異性結(jié)合反應(yīng)的原理，進(jìn)一步研究了抗克百威抗體對小鼠克百威中毒后的解毒作用，試驗(yàn)結(jié)果表明，抗體可以較好地緩解克百威對乙酰膽堿酯酶按捺作用的癥狀，使中毒小鼠逐漸恢復(fù)正常。同時將這兩種半抗原與載體蛋白牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)合成克百威免疫原和包被抗原，并用紫外光譜法測定克百威與載體蛋白結(jié)合物結(jié)合比。ELISA試劑盒在優(yōu)化免疫學(xué)反應(yīng)前提后，建立了克百威間接競爭ELISA法和直接競爭ELISA法，檢測限分別為0.005mg/L和0.01mg/L，檢測線性范圍分別為0.005～10mg/L和0.01～10mg/L，并在此基礎(chǔ)上研制了兩種用于檢測水、泥土、蔬菜、中毒樣品的酶聯(lián)免疫試劑盒，其ELISA試劑盒的重現(xiàn)性好，批內(nèi)批間及整體變異系數(shù)均低于8.0%，試劑盒檢測的正確度高，除嘔吐物樣品外，其余樣品的回收率均在89.62%以上。