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ELISA試劑盒HIV測(cè)定操作步驟
點(diǎn)擊次數(shù)：1011 發(fā)布時(shí)間：2015-5-14
ELISA試劑盒操作步驟
①、配液：將50ml濃縮洗滌液用蒸餾水或去離子水20倍稀釋至1000ml備用。
②、編號(hào)：將樣品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每板設(shè)陰性對(duì)照3孔、陽(yáng)性對(duì)照Ⅰ型、Ⅱ型各1孔，空白對(duì)照1孔。人ELISA試劑盒
③、加樣：分別在相應(yīng)孔加入待檢標(biāo)本、陰性、陽(yáng)性對(duì)照100μl，用封板膜封板后置37℃溫育30min。人ELISA試劑盒
④、洗滌：小心把封板膜揭去，用洗板機(jī)選擇5次程序，洗板后拍干。
⑤、加酶：每孔加酶結(jié)合物100μl（空白對(duì)照孔除外），充分混勻，用封板膜封板后置37℃溫育30min。
⑥、洗滌：小心把封板膜揭去，用洗板機(jī)選擇5次程序，洗板后拍干。。
⑦、顯色：每孔加入顯色劑A液和B液各50μl，輕輕振蕩混勻，封板后置37℃避光顯色15min。
⑧、測(cè)定：每孔加終止液50μl，輕輕振蕩混勻。設(shè)定酶標(biāo)儀波長(zhǎng)為450nm（建議使用雙波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀比色，參考波長(zhǎng)630 nm），空白調(diào)零，讀取各孔OD值。
⑨、判斷結(jié)果：計(jì)算臨界值（cut-off）（CO）值。
臨界值＝陰性對(duì)照A均值＋0.12
正常情況下，陰性對(duì)照孔的OD值≤0.10（若1孔陰性對(duì)照的OD值＞0.1應(yīng)舍棄，若有2孔或2孔以上陰性對(duì)照的OD值＞0.1，應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。）。樣品OD值＜臨界值者為HIV抗體陰性。
正常情況下，陽(yáng)性對(duì)照孔的OD值≥0.80（若1孔陽(yáng)性對(duì)照的OD值＜0.8應(yīng)舍棄，若有2孔或2孔以上陽(yáng)性對(duì)照的OD值＜0.8，應(yīng)重復(fù)實(shí)驗(yàn)。樣品OD值≥臨界值者為HIV抗體陽(yáng)性。
注意：對(duì)于篩查陽(yáng)性標(biāo)本，應(yīng)重新取樣雙孔復(fù)試，復(fù)試陽(yáng)性者應(yīng)按照《全國(guó)HIV檢測(cè)管理規(guī)范》送HIV確證實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行確證試驗(yàn)。
質(zhì)量控制：
每塊板設(shè)陰陽(yáng)性及空白對(duì)照，并于每次試驗(yàn)用自制質(zhì)控血清作質(zhì)控，將質(zhì)控血清孔OD值采用“即刻法"計(jì)算或標(biāo)在質(zhì)控圖上，如質(zhì)控有效，表明試驗(yàn)可靠；如失控，則要檢查試劑效期、儲(chǔ)藏溫度、試驗(yàn)溫度是否正常、操作步驟是否正確，直至重新試驗(yàn)使其在控。
干擾和交叉反應(yīng)
生物參考區(qū)間
正常人陰性
患者檢驗(yàn)結(jié)果的可報(bào)告區(qū)間
ELISA試劑盒陽(yáng)性表示HIV病毒感染.
臨床意義：
用于HIV感染的輔助診斷，抗HIV藥物治療的效果的監(jiān)測(cè)。