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ELISA試劑盒HIV抗體檢測操作要點
點擊次數(shù)：811 發(fā)布時間：2014-7-30
ELISA試劑盒HIV抗體檢測操作要點
ELISA試劑盒HIV抗體檢測是發(fā)現(xiàn)HIV感染的有效途徑，ELISA法是艾滋病初篩試驗室檢測HIV抗體普遍使用的方法之一。具體操作過程中ELISA法的影響因素較多，稍有不慎就會降低實驗的準(zhǔn)確性。避免諸多影響因素、保證結(jié)果準(zhǔn)確性，才能夠充分發(fā)揮ELISA法的優(yōu)點，經(jīng)過多次實驗的總結(jié)和分析，這篇文章分享了相關(guān)的經(jīng)驗。
1 試劑的選擇
通常所使用的ELISA試劑盒或其它試劑，必須是經(jīng)國家食品藥品監(jiān)督管理局注冊批準(zhǔn)、批檢合格、臨床評估質(zhì)量優(yōu)良，并且均在有效期內(nèi)使用。不同批號試劑組分不得混用，過期的試劑一律不得使用，首先提升實驗結(jié)果的可信度。
2 ELISA試劑盒樣品的采集與保存
用于檢測的標(biāo)本應(yīng)保持新鮮，標(biāo)本的采集應(yīng)盡量避免溶血，因紅細(xì)胞破裂可釋放過氧化物酶活性物質(zhì)，干擾結(jié)果，會出現(xiàn)假陽性；標(biāo)本如果受細(xì)菌污染，會因菌體中含有內(nèi)源性過氧化物酶而出現(xiàn)假陽性；混濁或有沉淀的血清樣品應(yīng)離心，待澄清后方可檢測，避免對結(jié)果造成影響。
用于HIV抗體檢測的血清或血漿樣品應(yīng)存放于-20 ℃以下，短期（1周內(nèi)）進(jìn)行檢測的樣品可存放于2 ℃～8 ℃。融解時應(yīng)上下顛倒充分混勻，動作要輕緩，避免產(chǎn)生氣泡。同時應(yīng)注意避免樣品反復(fù)凍融，否則會造成樣品抗體效價降低，影響其結(jié)果。
3 加樣
加樣前應(yīng)注意將微孔板條從冷藏環(huán)境中取出放置室溫，待試劑平衡后方可使用，未用完者需放入有干燥劑的密封袋中保存。整個HIV抗體檢測必須符合《全國艾滋病檢測技術(shù)規(guī)范》，嚴(yán)格防止交叉感染。操作時必須戴手套、穿工作衣，嚴(yán)格執(zhí)行消毒隔離制度。
加樣要用微量移液器（要求準(zhǔn)確性高并定期進(jìn)行校正），按規(guī)定的量加入孔內(nèi)，避免加在孔壁的邊緣，垂直加樣，不要使吸頭碰到酶標(biāo)板孔上的已包被的抗原，加樣時盡量慢吸快放，同時注意不要濺出，避免產(chǎn)生氣泡。
每次加樣都要更換吸頭，做到一樣一吸頭，防止發(fā)生交叉污染，干吸頭預(yù)先在血清中抽吸3次，以便保證加樣量的準(zhǔn)確性。滴加試劑應(yīng)先將滴瓶搖勻并擠去*滴后再進(jìn)行滴加，以免產(chǎn)生氣泡。
4 ELISA試劑盒溫育
抗原抗體反應(yīng)需要在一定的溫度下（zui適溫度為37 ℃），經(jīng)過一定的時間才能達(dá)到反應(yīng)的平衡點。溫育一般采用能使反應(yīng)液溫度迅速達(dá)到平衡的水育法，一種是放在水育箱的隔板上，另一種是放在溫箱的濕盒內(nèi)，水要浸至板條的1/3處，不可將板條疊加放置，以保證各板的溫度平衡一致。
5 洗板
由于待檢血清中可能有HIV病毒的存在，采用ELISA法進(jìn)行檢測HIV抗體時，盡量使用洗板機洗板，一方面可以確保檢測人員的安全，另一方面可以防止環(huán)境污染。洗板在ELISA檢測中是一個非常重要的環(huán)節(jié)，洗板的合格與否直接影響檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。因此，洗板時一定要先放好，洗滌開始時注意觀察洗板機上的每個吸液針是否都一致地插入孔底，并且將孔內(nèi)液體全部吸干，按說明書要求設(shè)置浸泡的時間以及洗滌的次數(shù)。洗滌結(jié)束后進(jìn)行拍板，同時要用蒸餾水沖洗管道，避免由于洗液的結(jié)晶而造成管道堵塞。同時要注意各種ELISA試劑盒的洗滌液不可混用。
6 ELISA試劑盒顯色與觀察結(jié)果
按照說明書規(guī)定的時間、溫度恒定、反應(yīng)后終止，并在顯色反應(yīng)終止后立即用酶標(biāo)儀進(jìn)行比色。
7 小結(jié)
ELISA試劑盒在加液與混勻過程中不應(yīng)產(chǎn)生氣泡，否則會使測定的OD值偏高，易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
ELISA法是艾滋病初篩試驗室檢測HIV抗體普遍使用的方法，選擇合格的試劑和儀器，操作中嚴(yán)格按照ELISA試劑盒說明書要求實驗，這樣就能保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性。