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全血RNAout
點擊次數(shù)：1046 發(fā)布時間：2013-6-25
全血RNAout
產(chǎn)品及特點 本產(chǎn)品是天澤基因自主開發(fā)的，專門從全血樣品中快速提取總RNA的試劑盒，主要用于提取全血細胞的總RNA（提取血漿病毒RNA需使用病毒RNAout， 提取純化后的白細胞RNA可使用動物RNAout）。本產(chǎn)品經(jīng)過天澤基因科技人員精心優(yōu)化而得，多項指標超過國內(nèi)外同類產(chǎn)品。
1. RNA無明顯降解和DNA污染， OD260/280均在1.9以上。血液RNA的產(chǎn)量與動物種類和動物的狀態(tài)（如有疾病與否）有很大關(guān)系，人全血產(chǎn)量為2-6 μg/mL，兔全血產(chǎn)量為5-10 μg/mL。
2. 操作簡單，直接使用新鮮的或冷凍的抗凝全血樣品，不需裂解紅細胞等任何預(yù)處理步驟，整個提取過程只需要十多分鐘，可以全在室溫下進行。
3. 處理量大，每管的樣品處理量可以達到1.5 mL，高于進口的同類產(chǎn)品。
4. 與常用的抗凝劑（包括肝素，EDTA，檸檬酸鈉，草酸鈉）兼容，得到的RNA可以直接用于RT-PCR和Northern雜交等研究。
規(guī)格及成分 成份 50次包裝 250次包裝
溶液A 50 mL 250 mL
溶液B 15 mL 75 mL
溶液C 25 mL 125 mL
溶液D 25 mL 125 mL
使用手冊 1份 1份
運輸及保存 常溫運輸，4℃保存，溶液B和溶液C有腐蝕性。4℃保存的溶液A可能會產(chǎn)生白色沉淀，用前需65℃水浴加熱直到沉淀溶解。有效期一年。
自備試劑 氯仿，異丙醇，75%乙醇，RNA溶解液（如液相RNase清除劑）。
使用方法 1. 將0.2-1.5 mL新鮮或解凍后的抗凝全血加入到1.5 mL塑料離心管中， 15000 g室溫離心3分鐘，棄上清（血漿）。如果此時血液細胞沉淀體積大于0.2 mL， 則需要減少血液的使用量，具體減少量需根據(jù)具體情況決定，因為各個個體（尤其是患者）血液中白細胞數(shù)目差別很大。如果提取 0.1 mL以下的微量血液樣品加入天澤基因的微量助沉劑RNADOWN。
2. 將1 mL溶液A加入到血液細胞沉淀中，用移液槍吹打沉淀使細胞裂解。
3. 將0.3 mL的溶液B和0.2 mL氯仿加入離心管，劇烈震蕩30秒。
4. 13000-15000 g室溫離心5分鐘，將上清液（為無色或淺紅色，約0.5-0.9 mL）轉(zhuǎn)移到另一干凈離心管中。為防止污染，留100 uL左右的上清液。下層有機相一般呈深紅色，中間層為白色，含有DNA，蛋白質(zhì)和其他細胞破碎物，避免觸及或吸取。
5. 加入0.5 mL的溶液C和0.2 mL的氯仿到上清液中，用手上下劇烈搖晃30秒。
6. 13000-15000 g室溫離心3分鐘，將上清液（無色，約1 mL）轉(zhuǎn)移到另一干凈離心管中，避免觸及或吸取有機相及其上面的白色膜狀物（蛋白質(zhì)）。可以按每次吸取100-200 uL的方式分批轉(zhuǎn)移。
7. 在上清液中加入1/2體積的溶液D，用手上下劇烈搖晃30秒，溶液將呈白色渾濁狀。
8. 13000-15000 g室溫離心5-30分鐘，小心移棄上清液，避免觸及管底大量的白色RNA沉淀。
9. 在離心管中加入1 mL 75%乙醇，振蕩器上振蕩混均30秒。室溫離心13000-15000 g 1分鐘，RNA此時在管底形成細小沉淀。小心吸棄上清液，注意不要吸棄RNA沉淀。
10. 重復(fù)第9步的75%乙醇清洗步驟一次。
11. 短暫快速離心數(shù)秒使管壁上殘留液體沉到管底（約50 uL），用移液槍小心吸棄，注意不要吸棄沉淀。此步十分重要，因為殘留的乙醇會影響后續(xù)反應(yīng)。
12. 室溫短暫放置2分鐘，立即加入適量（一般為10-30 μL）溶解液使RNA沉淀溶解。建議使用具有滅活殘留RNase功能的新型RNA溶解液液相RNase Erasol而不要使用經(jīng)典的DEPC水。千萬不要用真空離心法使RNA沉淀過于干燥，否則RNA將變得十分難溶。RNA樣品可以直接使用，也可以存放于-80℃長期保存。