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研域(上海)化學(xué)試劑有限公司

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雞卵黃免疫球蛋白(IgY)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

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雞卵黃免疫球蛋白(IgY)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
本試劑盒僅供研究使用。
檢測范圍:96T
30 ng/L - 900ng/L
使用目的:
本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中卵黃免疫球蛋白(IgY)含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中雞卵黃免疫球蛋白(IgY)水平。用純化的雞卵
黃免疫球蛋白(IgY)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入卵黃
免疫球蛋白(IgY),再與  HRP標(biāo)記的卵黃免疫球蛋白(IgY)抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-
酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物 TMB顯色。TMB在   HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,
并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的。顏色的深淺和樣品中的卵黃免疫球蛋白(IgY)呈正相
關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中雞卵黃免疫
球蛋白(IgY)濃度。
雞卵黃免疫球蛋白(IgY)酶聯(lián)免疫分析試劑盒組成

標(biāo)本要求
1.標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能
馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因   NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
操作步驟
1.標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀
釋。

2.加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)孔、
待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣 50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,
然后再加待測樣品 10μl(樣品zui終稀釋度為 5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡
量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育30分鐘。
配液:將 30倍濃縮洗滌液用蒸餾水  30倍稀釋后備用
洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30秒后棄去,如此
重復(fù) 5次,拍干。
加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
溫育:操作同 3。
洗滌:操作同 5。
顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色
15分鐘.
10.終止:每孔加終止液    50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn))。
11.測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD 值)。測定應(yīng)在加終止
液后 15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
雞卵黃免疫球蛋白(IgY)酶聯(lián)免疫分析試劑盒操作程序總結(jié):

計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo), OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的
OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與  OD值計(jì)算出標(biāo)
準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù),
即為樣品的實(shí)際濃度。
雞卵黃免疫球蛋白(IgY)酶聯(lián)免疫分析試劑盒注意事項(xiàng)
1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未
用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2.濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間
控制在 5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
4.請每次測定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測物質(zhì)含量過高(樣本  OD值
大于標(biāo)準(zhǔn)品孔di一孔的 OD值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測定,計(jì)
算時(shí)請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。
5.封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
6.底物請避光保存。
7.嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
9.本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
10.如與英文說明書有異,以英文說明書為準(zhǔn)。
保存條件及有效期
1.試劑盒保存:2-8℃。
2.有效期:6個(gè)月

 

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