ELISA試劑盒近日網(wǎng)上關(guān)于的討論帖子很多，今天也發(fā)表一下自己的一些看法，對(duì)ELISA的見解有不對(duì)的地方，希望指正或者直接拍磚。其實(shí)很多客戶上當(dāng)受騙都和網(wǎng)絡(luò)有關(guān)系，如果你不是在網(wǎng)上找試劑，而是認(rèn)真看看帖子，可能會(huì)改變你原來的選擇。
ELISA試劑盒首先，談一下市場(chǎng)。首先RnD和Bender等一些的還是很值得信賴的，也得到了市場(chǎng)的認(rèn)可，特別是RnD的盒子，我們賣的很好，就是價(jià)格好貴，經(jīng)費(fèi)不是很充裕的實(shí)驗(yàn)室難消費(fèi)的起。
第二，談一下如何靈活應(yīng)用ELISA這個(gè)檢測(cè)方法以及如何去挑選ELISA試劑盒。ELISA這個(gè)方法的原理，大家都很清楚，網(wǎng)上的資料一大堆。可真正用起來的時(shí)候，有時(shí)候就有點(diǎn)犯糊涂，我談一下自己的理解。
1、對(duì)于一些小分子的檢測(cè)，比如前列腺素、糖皮質(zhì)激素的檢測(cè)，我的理解是要用競(jìng)爭(zhēng)法ELISA去檢測(cè)，也要購買采用這個(gè)方法的盒子。一般細(xì)胞因子的檢測(cè)，都是采用常規(guī)的夾心法ELISA檢測(cè)，因?yàn)橐蜃臃肿恿勘容^大，一般10幾個(gè)KD左右，很容易找到兩個(gè)或者多個(gè)抗原表位。而小分子很難找到兩個(gè)不同的表位，也就決定了包被抗體和檢測(cè)抗體無法同時(shí)結(jié)合小分子并固相化。解決方案就是酶標(biāo)板上包被二抗，每個(gè)孔加入一定量的酶標(biāo)的小分子，然后加樣品，再加不帶標(biāo)記的檢測(cè)抗體，顯色底物。樣品的目的小分子的含量越高，吸光度越低。
2、對(duì)于胰島素的檢測(cè)，我還是推薦millpore 旗下LInco公司的檢測(cè)試劑盒，不管是放免還是ELISA，據(jù)說權(quán)在他們手中。
3、有些客戶會(huì)用OVA（卵清蛋白）做一些哮喘，過敏性腸炎的模型，后來會(huì)檢測(cè)粘膜特異性的sIgA以及血清里面IgG，IgE等指標(biāo)。當(dāng)客戶向我咨詢購買這幾個(gè)指標(biāo)的盒子的時(shí)候，我很肯定地說這些指標(biāo)的檢測(cè)要你自己特制，不會(huì)有商品化的盒子出售的。當(dāng)baidu，google一下，頁面出來大量的商品化的盒子，千篇一律的說明書時(shí)候，我真的是蒙了，我懷疑自己跟不上時(shí)代了。我這里不去評(píng)論這些盒子的真假，我仍然建議做這些檢測(cè)指標(biāo)的戰(zhàn)友，選擇sigma公司V級(jí)別的OVA，然后用這個(gè)來造模，自己包板摸條件，用OD值來比較抗體含量的變化。
4、ELISA檢測(cè)方法簡(jiǎn)單，靈敏度高，我個(gè)人覺得ELISA檢測(cè)血清或者培養(yǎng)上清的細(xì)胞因子、胰島素、激素等分泌型的小分子蛋白的定量檢測(cè)；病原體抗原的定性與定量；評(píng)估自己制備的血清抗體的效價(jià)等。好多客戶有個(gè)誤區(qū)，拿來一個(gè)指標(biāo)就想當(dāng)然地嘗試用ELISA去檢測(cè)，我還是建議多動(dòng)腦，該檢測(cè)活性的檢測(cè)活性，該做western的做western。
5、我主要的客戶是醫(yī)學(xué)院校，做實(shí)驗(yàn)面向的種屬主要是人，大鼠和小鼠，現(xiàn)在市面上雞、牛、馬、羊、兔各種指標(biāo)的盒子都有售，真不知道這些抗體是怎么來的。據(jù)我所了解，這些炎癥指標(biāo)還是有很大種屬特異性的。
ELISA試劑盒NO的檢測(cè)，一般都是采用經(jīng)典的Greiss法，現(xiàn)在市場(chǎng)上竟然有NO ，真是徹夜未眠也搞不明白。