冬日里溫暖的竹蔗茅根水，暖手暖心，夏日里冰鎮(zhèn)的青瓜甘蔗汁，口感清甜——不過在品嘗這份清甜的同時，在選料時也要警惕霉變的“紅心”甘蔗。俗話說“清明蔗，毒過蛇”，經(jīng)歷幾個月的運輸、存儲過程，久儲的甘蔗可能存在真菌污染和霉變風(fēng)險。作為強烈的嗜神經(jīng)毒素，3-硝基丙酸(3-nitropropionic acid, 3-NPA)常見于霉變的甘蔗中，是由節(jié)菱孢霉菌和米曲霉菌等產(chǎn)生的毒性代謝物，LD50為50mg/kg。患者食用霉變甘蔗，會引起嘔吐、腹瀉甚至抽出、昏迷，嚴(yán)重者可發(fā)生腦缺血性壞死，呼吸衰竭甚至死亡，重癥中毒患者還可能留有語言、運動障礙等后遺癥。
本文參考BJS 202205《甘蔗及甘蔗汁中3-硝基丙酸的測定》，樣品經(jīng)提取后，采用Shim-pack GIST C18-AQ色譜柱(1.9μm, 2.1mm×100mm, PN: 227-30807-02)，LCMS-8050三重四級桿質(zhì)譜儀進行測定，空白樣品中高、中、低三個濃度水平的加標(biāo)回收率在82.0~85.7%。該方法可為甘蔗及甘蔗汁中3-硝基丙酸的測定提供參考。
實驗部分
1.1 實驗儀器及耗材
Shimadzu LC-30AD 與 LCMS-8050 聯(lián)用系統(tǒng)；
色譜柱：Shim-pack GIST C18-AQ（1.9 μm， 2.1× 100 mm；P/N：227-30807-02）；
SHIMSEN Disc HPTFE 針式過濾器（ P/N：380-00341）；
LC/MS 認證樣品瓶 LabTotal Vial（ P/N：227-34001-01）；
SHIMSEN Pipet 移液槍：SHIMSEN Pipet PMII-10（ P/N：380-00751-02）；
SHIMSEN Pipet PMII-100（ P/N：380-00751-04）；
SHIMSEN Pipet PMII-1000（ P/N：380-00751-06）。
1.2 分析條件
UHPLC 條件
色譜柱：Shim-pack GIST C18-AQ（1.9 μm，2.1× 100 mm；P/N：227-30807-02）；
流 速：0.2 mL/min
進樣量：5 μL
柱 溫：30 ℃
流動相：A：0.1%甲酸水溶液 B：甲醇
質(zhì)譜條件
離子化模式：ESI，負離子掃描 掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測 (MRM)
碰撞氣：氬氣
加熱氣：空氣，10 L/min
霧化氣：氮氣，3 L/min
干燥氣：氮氣，10 L/min
接口溫度：300℃
DL 溫度：250 ℃
加熱模塊溫度：400 ℃
接口電壓：-2.0kV
各化合物 MRM 參數(shù)見下表
1.3 樣品前處理(制樣及提取)
固體樣品(甘蔗)：取20g以上去皮甘蔗，切段，再切成小于0.5cm的小塊，攪碎混勻，置于潔凈容器中密閉。
液體樣品(甘蔗汁)：充分混勻，直接取用
提取：稱取2g試樣于50mL離心管中，加水10mL，超聲提取10min，用磷酸調(diào)pH至20.±0.1，加入10mL乙酸乙酯，渦旋1min，10000rpm離心5min，上清液移出備用。重復(fù)上述提取步驟1次，合并上清液，45℃氮吹近干，水定容至1.0mL，過0.22μm微孔濾膜，上機測定。
實驗結(jié)果
2.1 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的 MRM ?譜圖
基質(zhì)標(biāo)液MRM色譜圖(10 ng/mL)
2.2 樣品測試和添加回收結(jié)果
將空白樣品進行高、中、低三個濃度水平加標(biāo)，按照上述前處理方法處理后上機， 結(jié)果顯示，加標(biāo)回收率為 82.0-85.7%，詳細數(shù)據(jù)見下表：
樣品及樣品加標(biāo)MRM譜圖
——空白樣品(黑色)；樣品加標(biāo)(粉色，5μg/mL)
(空格分隔,最多3個,單個標(biāo)簽最多10個字符)
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