免疫親和柱基于抗原抗體反應(yīng)，特異性抗體連接在柱體內(nèi)，選擇性吸附樣品中的待檢物，雜質(zhì)不被吸附，流出柱外，柱上結(jié)合的目標(biāo)物再被特定的洗脫液洗下來(lái)，可以用于液相色譜分析或者ELISA含量測(cè)定，是一種高效的前處理柱。可選擇性吸附樣品液中的毒素，從而對(duì)樣品起到非常針對(duì)性的純化作用，經(jīng)過(guò)柱凈化后的樣品液可直接用于HPLC分析。它與HPLC配合使用可達(dá)到快速測(cè)定的目的，以改善信噪比，提高檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度。
下面咱們來(lái)了解下免疫親和柱的使用技巧，希望能夠幫助到大家：
1、上柱的樣品溶液應(yīng)該保持酸堿中性、無(wú)懸浮物、甲醇濃度不宜過(guò)高。
2、若樣品為復(fù)雜樣品，例如高蛋白、高油脂、酸性樣品，可以將提取液分兩次提取樣品，可以提高提取效果。
3、樣品過(guò)柱及甲醇洗脫速度要慢且均勻，約每秒1-2滴。
4、抗原抗體發(fā)生反應(yīng)的最佳溫度是在25℃左右，實(shí)驗(yàn)需要的環(huán)境溫度應(yīng)是室溫24℃-28℃，太高或太低的溫度都會(huì)對(duì)回收率有一定的影響。在使用前需要恢復(fù)至室溫再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
5、不要在無(wú)水狀態(tài)下，瓊脂容易干燥縮，影響質(zhì)量。
6、儲(chǔ)存條件為4℃-8℃。切記0℃以下的低溫，因?yàn)榫彌_液凍結(jié)，會(huì)嚴(yán)重影響親和柱內(nèi)的物理結(jié)構(gòu)，對(duì)質(zhì)量影響很大。
7、洗脫一般選擇試劑甲醇，為增強(qiáng)洗脫效果可加大甲醇體積。
值得注意的是當(dāng)測(cè)試不同的洗脫條件時(shí)，有些緩沖液雖然不能洗脫抗原，但在其他條件改變后仍可能是有效的洗脫緩沖液。實(shí)際上有些非洗脫緩沖液，可能改變抗原抗體反應(yīng)的平衡。例如高鹽條件具有疏水作用。應(yīng)用這些條件可以比較容易地收集抗體基質(zhì)上的抗原。
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