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氨基酸分析色譜柱的活化及維護(hù)方法介紹

閱讀：1820 發(fā)布時(shí)間：2022-3-22

　　氨基酸是構(gòu)成蛋白質(zhì)的基本單位，是生物、衛(wèi)生、農(nóng)牧業(yè)、食品、飲料及飼料等行業(yè)生產(chǎn)和科研中的分析測(cè)試項(xiàng)目，并且隨著相關(guān)行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)的制定和完善，氨基酸的定性和定量分析將成為企業(yè)的檢測(cè)項(xiàng)目。

　　由于氨基酸種類較多，結(jié)構(gòu)接近，沒(méi)有紫外或熒光響應(yīng)，使得氨基酸分析一直是高效液相色譜領(lǐng)域較難解決的問(wèn)題之一。針對(duì)國(guó)內(nèi)科研與生產(chǎn)單位的實(shí)際需要，開(kāi)發(fā)了氨基酸分析色譜柱。

　　氨基酸分析色譜柱技術(shù)包括填料技術(shù)和裝柱技術(shù)，填料技術(shù)自不待言，填料的好壞對(duì)色譜柱分離性能和選擇性有決定性影響。裝柱技術(shù)也沒(méi)有想象中的這么簡(jiǎn)單，不同固定相、不同粒徑、不同柱管內(nèi)徑和長(zhǎng)度，裝柱工藝都有所不同，要裝出緊密、穩(wěn)定、均一的柱床，更多是一門藝術(shù)，需要經(jīng)驗(yàn)積累。

　　高效液相色譜分析中，氨基酸分析色譜柱的選擇直接影響了分離效果的好壞，選擇合適的產(chǎn)品可以縮短方法開(kāi)發(fā)所需的時(shí)間，并且使方法更具穩(wěn)定性。分析大分子量化合物選擇大孔徑色譜柱；對(duì)于高pH值或者堿性化合物需要選擇高封端或者特殊封端的色譜柱，以改善峰形，延長(zhǎng)其使用壽命等。

　　拿到一根新柱的時(shí)候應(yīng)該怎樣進(jìn)行活化及維護(hù)？為什么要這樣做？

　　新柱活化，實(shí)際上是一個(gè)平衡的過(guò)程，除了用流動(dòng)相平衡外，有時(shí)候還必須用所測(cè)樣品對(duì)新柱進(jìn)行平衡，特別是測(cè)定分子量比較高的多肽，尤其重要。因?yàn)榉肿恿扛叩奈镔|(zhì)分子，擴(kuò)散速度慢，平衡所需時(shí)間也相應(yīng)較長(zhǎng)。

　　具體平衡方式也很簡(jiǎn)單，多進(jìn)幾次樣品，直到峰面積和保留時(shí)間穩(wěn)定，再進(jìn)行正式進(jìn)樣測(cè)定。如果要加快平衡時(shí)間，把前面用來(lái)平衡的進(jìn)樣樣品濃度加大，或者不等洗脫完成，連續(xù)進(jìn)樣多針。用待測(cè)物對(duì)新柱平衡，目的是將硅膠基質(zhì)填料表面具有非特異性吸附的位點(diǎn)的吸附能力飽和掉。

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