海藻糖含量檢測試劑盒 微量法

產品名稱: 海藻糖含量檢測試劑盒 微量法

產品英文名: Micro Trehalose Content Assay Kit

產品貨號：BC0335        產地：北京市通州區馬駒橋聯東U谷8三樓

產品規格：100管/96樣        產品商標：solarbio
保存與運輸：4℃保存或-20℃保存；            參考價格：840
庫存狀態：現貨                          
關鍵字:    海藻糖檢測試劑盒| 海藻糖含量檢測試劑盒| 海藻糖|試劑盒

簡要介紹：
海藻糖存在于大量有機體中，包括細菌、藻類、酵母、植物、昆蟲和其他無脊椎動物。由于海藻糖具有*的不同于其他碳水化合物的生物學特性，能在干旱、高溫、脫水、冷凍、高滲透壓及毒性物質等惡劣環境下保護生物體細胞蛋白質、脂肪、糖類、核酸等組分不受損害。

產品詳細描述
產品內容：
提取液：液體100mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存；
標準品：粉劑×1支，含10mg海藻糖。
產品說明：
海藻糖存在于大量有機體中，包括細菌、藻類、酵母、植物、昆蟲和其他無脊椎動物。由于海藻糖具有*的不同于其他碳水化合物的生物學特性，能在干旱、高溫、脫水、冷凍、高滲透壓及毒性物質等惡劣環境下保護生物體細胞蛋白質、脂肪、糖類、核酸等組分不受損害。
測定方法采用蒽酮比色法。具有靈敏度高﹑簡便快捷﹑適用于微量樣品的測定等優點。但是蒽酮比色法也存在一定缺陷，如果樣本中含有可溶性糖，則會影響測定。本試劑盒建議用于除海藻糖外不含其他可溶性糖樣本的測定。
需自備的儀器和用品：
可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿﹑研缽、濃硫酸和蒸餾水。

操作步驟：
一、海藻糖提取：   

1. 細菌或細胞處理：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每500萬細菌或細胞加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復30次），室溫靜置45min，振蕩3~5次，冷卻后，8000g，常溫離心，取上清。
2. 組織的處理：稱取約0.1g樣本，常溫研碎，加入1mL提取液，室溫靜置45min，振蕩3~5次，冷卻后，8000g，常溫離心，取上清。
3. 血清（漿）的處理：吸取約100μL血清（漿），加入0.9mL提取液，室溫靜置45min，振蕩3~5次，冷卻后，8000g，常溫離心，取上清。
4. 標準品的處理：標準品用1mL雙蒸水溶解，溶液濃度為10mg/mL，稀釋到0.1、0.08、0.06、0.04、0.02、0mg/mL。

二、測定操作表：

1. 分光光度計或酶標儀預熱30min，波長調節620nm，蒸餾水調零。調節水浴鍋95℃。
2. 工作液的配制：臨用前在每瓶試劑一中加入7mL蒸餾水后，緩慢加入28mL濃硫酸，不斷攪拌，充分溶解，待用。用不完的試劑4℃保存一周。
3. 標準曲線的建立：取60mL標準液和240mL現配的工作液混勻，95℃水浴10 min，（蓋緊，防止水分散失）自然冷卻室溫，取200mL比色皿或酶標板中，在620nm處測吸光值A。根據標準樣本的濃度（y）和吸光度（x）建立標準曲線。
4. 樣本測定：取60mL樣本和240mL現配的工作液混勻，95℃水浴10 min，（蓋緊，防止水分散失）自然冷卻室溫，取200mL比色皿或酶標板中，在620 nm 波長下測定吸光度值為A。

若吸光值大于1，請將樣本用提取液適當稀釋。后計算時乘以相應的稀釋倍數。 
三、海藻糖含量計算：
使用微量比色皿時，計算公式如下：
1、根據標準曲線計算樣本中海藻糖的含量y（mg/mL）。
2、按樣本鮮重計算：
海藻糖含量(mg/g 鮮重)= V1×y÷(W×V1÷V2)=y ÷W。
3、按樣本蛋白濃度計算：
海藻糖含量(mg/mg prot)=V1×y÷(V1×Cpr)=y÷Cpr。
4、按細菌或細胞數量計算：
海藻糖含量(μg/10⁴ cell)=1000 × V1 × y÷(500 × V1÷V2)=2× y
5、血清（漿）海藻糖含量計算
海藻糖含量（mg/mL）＝V1×y÷(V3×V1÷V2)=10×y
V1: 反應體系中樣本體積，0.06mL；V2：提取液總體積，1mL；V3：血清、血漿體積，0.1mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細胞或細菌總數，500萬；1000:單位換算系數，1mg/mL=1000mg/mL。
 注意：低檢測限為10μg/g 鮮重或0.1μg/mg prot。

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