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抗壞血酸過氧化物酶（APX）測試盒 維生素C

貨號：BC0220

規格：50管/48樣

產品簡介：

    APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗壞血酸代謝的關鍵酶之一。APX具有多種同功酶，分別定位于葉綠體、胞質、線粒體、過氧化物和乙醛酸體，以及過氧化體和類囊體膜上。APX 催化H₂O₂ 氧化AsA，是植物AsA的主要消耗者。APX 的活性直接影響到AsA 的含量，在脅迫和解脅迫條件下，APX 與AsA 具有一定的負相關性。

    APX催化H₂O₂氧化AsA，通過測定AsA 的氧化速率，可計算得APX 活力。

試驗中所需的儀器和試劑：

    低溫離心機、紫外分光光度計、1mL石英比色皿、移液槍、研缽、冰和蒸餾水。

產品內容：

試劑一：液體×1瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入5mL雙蒸水充分溶解；

試劑三：液體×1支，4℃保存。

操作步驟：

一、粗酶液提取 ：   

按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL試劑一）進行冰浴勻漿。13000g，4℃離心20min，取上清置冰上待測。

二、測定操作表：

1. 分光光度計預熱30 min以上，調節波長到290 nm，用蒸餾水調零。

2. 試劑一在25℃中預熱30min以上。

3. 空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL蒸餾水、700μL預熱的試劑一、100μL試劑二和100μL試劑三，迅速混勻后在290nm測定10 s和130 s光吸收A1和A2，△A空白管=A1-A2。

4. 測定管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL上清液、700μL預熱的試劑一、100μL試劑二和100μL試劑三，迅速混勻后在290nm測定10 s和130 s光吸收A3和A4，△A測定管=A3-A4。

APX活力計算：

(1) 按樣本蛋白濃度計算

活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘氧化1μmol AsA 為1U。

APX(U/mg prot) = (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d）×V反總×10⁶÷(Cpr×V樣)÷T

=1.79×(△A測定管-△A空白管) ÷ Cpr

ε：AsA在290nm處摩爾吸光系數為2.8×10³L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1 cm；V反總：反應體系總體積（L），1000μL=1×10^-3 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；Cpr：上清液蛋白質濃度（mg/mL），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質含量測定試劑盒；V樣：加入反應體系中上清液體積（mL），100μL=0.1 mL；T：催化反應時間（min），2min。

（2）按樣本質量計算

單位的定義：每g組織每分鐘氧化1μmol AsA 為1U。

APX(U/g ) = (△A測定管-△A空白管)÷(ε×d）×V反總×10⁶÷(W×V樣÷V樣總)÷T

=1.79×(△A測定管-△A空白管) ÷W

ε：AsA在290nm處摩爾吸光系數為2.8×10³ L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1 cm；V反總：反應體系總體積（L），1000μL=1×10^-3 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；V樣：加入反應體系中上清液體積（mL），100μL=0.1 mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；W，樣本質量，g；T：催化反應時間（min），2min。

抗壞血酸過氧化物酶（APX）測試盒 維生素C