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苯丙氨酸解氨酶（PAL）活性檢測試劑盒說明書微量法

多酚氧化酶（PPO）活性檢測試劑盒說明書可見分光光度法

注意：正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

貨號：BC0190

規格：50T/24S

多酚氧化酶生化檢測試劑盒可見分光光度法產品簡介：PPO主要存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是一種含銅的氧化酶，能使一元酚和二元酚氧化產生醌，從而引起褐化，與果蔬加工、茶葉品質和組培等密切相關。PPO能夠催化鄰苯二酚產生醌，后者在410nm有特征光吸收。

試驗中所需的儀器和試劑：可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

產品內容：提取液：液體60mL×1瓶，4℃保存，用前混勻；試劑一：液體40mL×1瓶，4℃保存；試劑二：液體10mL×1瓶，4℃保存。

操作步驟：

一、粗酶液提取：

1. 收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照每500萬細菌或細胞加入1mL提取液，超聲波破碎細菌或細胞（功率20％，超聲3秒，間隔10秒，重復30次）；8000g4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。

• 稱取約0.1g組織，加入1mL提取液進行冰浴勻漿。8000g4℃離心10分鐘，取上清，置冰上待測。

• 測定操作表：

1、分光光度計預熱30min以上，調節波長410nm，蒸餾水調零。

2. 樣本測定

冷卻后，5000g，常溫離心10min，收集上清，用蒸餾水調零，410nm處檢測測定管和對照管吸光度，計算ΔA=A測定-A對照。

注意:每個測定管需要設置一個對照管,可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液,然后集中進行5min沸水浴處理。

多酚氧化酶生化檢測試劑盒可見分光光度法PPO活性計算：

（1）按樣本蛋白濃度計算：單位的定義：每分鐘每mg組織蛋白在每mL反應體系中使410nm處吸光值變化0.01定義為一個酶活力單位。PPO（U/mgprot）=ΔA÷0.01×V反總÷（Cpr×V樣）÷T=60×ΔA÷Cpr

1. 按樣本鮮重計算：單位的定義：每分鐘每g組織在每mL反應體系中使410nm處吸光值變化0.01定義為一個酶活力單位。PPO（U/g鮮重）=ΔA÷0.01×V反總÷（W÷V樣總×V樣）÷T=60×ΔA÷W

1. 按細菌或細胞數量計算：單位的定義：每分鐘每1萬個細菌或細胞在每mL反應體系中使410nm處吸光值變化0.01定義為一個酶活力單位。PPO（U/104cell）=ΔA÷0.01×V反總÷（500÷V樣總×V樣）÷T=0.12×ΔAV反總：反應體系總體積，0.9mL；V樣：加入反應體系中樣本體積，0.15mL；V樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞數量，500萬；T：反應時間，10min。

注意事項：不同樣本的多酚氧化酶適合的反應溫度略有差別，可在25-37℃之間進行調節。

相關文獻：

《Effect of L-Arginine on Maintaining Storage Quality of the White Button Mushroom (Agaricus bisporus)》 作者:Beibei Li，Yang Ding，Xiuli Tang，Guoyi Wang，Shujuan Wu，Xianxian Li，Xiaofei Huang，Tongtong Qu，Jifeng Chen 期刊:Food and Bioprocess Technology 影響因子:3.032 PMID:
《MTA1 promotes the invasion and migration of pancreatic cancer cells potentially through the HIF-α/VEGF pathway》 作者:B Li, Y Ding, X Tang, G Wang, S Wu, X Li 期刊:Journal of Receptor and Signal Transduction Research. 影響因子:2.998 PMID:30396299