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超氧陰離子含量檢測試劑盒說明書
 可見分光光度法
貨號：BC1290
規格：50T/48S
產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1. 試劑四：自備氯仿；

2. 標準品：10μmol/mL亞*。

產品說明：
生物體內超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號傳導的作用，但積累過多時會對細胞膜及生物大分子產生破壞作用，導致機體細胞和組織代謝異常，從而引起多種疾病。
超氧陰離子與鹽酸羥胺反應生成NO₂^-，NO₂^-在對*磺酰胺和萘*鹽酸鹽的作用下，生成紫紅色的偶氮化合物，在530nm有特征吸收峰，根據A₅₃₀值可以計算樣本中O₂^－含量。
技術指標：
低檢出限：0.00124 μmol/mL
線性范圍：0.0019-0.25μmol/mL
注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品：
天平、水浴鍋、離心機、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、研缽/勻漿器、氯仿和蒸餾水。
操作步驟：具體操作步驟詳見“產品資料"附件
注意事項：

1. 如果測定吸光值超過線性范圍吸光值，可以增加樣本量或者稀釋樣本后再進行測定。

2. 樣本制備好之后，立刻進行測定，請勿將樣本進行長時間的低溫保存，以免影響測定結果。

3. 試劑四有一定的毒性，請操作時做好防護措施。

實驗實例：

1. 取0.1g小鼠肝臟加入1mL提取液充分研磨，12000rpm，4℃，離心20min，取上清之后按照測定步驟操作，測得計算?A樣本=A測定管-A空白管=0.252-0.008=0.244，標準曲線y=5.1285x+0.013，計算x=0.045，按樣本質量計算含量得：

超氧陰離子含量（μmol/g 質量）=2x÷W=0.9 μmol/g 質量。

1. 取0.1g木槿加入1mL提取液充分研磨，12000rpm，4℃，離心20min，取上清之后按照測定步驟操作，測得計算?A樣本=A測定管-A空白管=0.036-0.008=0.028，標準曲線y=5.1285x+0.013，計算x=0.0029，按樣本質量計算含量得：

超氧陰離子含量（μmol/g 質量）=2x÷W=0.058 μmol/g 質量。
相關發表文獻：

1. Bingbing Cai,Qiang Li,Fengjiao Liu,et al. Decreasing fructose-1,6-bisphosphate aldolase activity reduces plant growth and tolerance to chilling stress in tomato seedlings. physioogia plantarum. December 2017;

2. Zhongyuan Liu,Peilong Wang,Tengqian Zhang,et al. Comprehensive analysis of BpHSP genes and their expression under heat stresses in Betula platyphylla. Environmental and Experimental Botany. August 2018;(IF3.712)

參考文獻：

1. 王愛國, 羅廣華. 植物的超氧物自由基與羥胺反應的定量關系[J]. 植物生理學通訊, 1990, 6(3): 55-57.

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