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elisa間接法原理及實(shí)驗(yàn)步驟

閱讀:4022      發(fā)布時(shí)間:2015-7-14
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  ELISA實(shí)驗(yàn)中文酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)。可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。間接法是多種實(shí)驗(yàn)方法中常用方法。elisa間接法原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體以檢測(cè)已與固相結(jié)合的受檢抗體,故稱為間接法。

elisa間接法操作步驟如下:

  (1)將特異性抗原與固相載體連接,形成固相抗原:洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。

  (2)加稀釋的受檢血清:其中的特異抗體與抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體。其他免疫球蛋白及血清中的雜質(zhì)由于不能與固相抗原結(jié)合,在洗滌過(guò)程中被洗去。

  (3)加酶標(biāo)抗抗體:與固相復(fù)合物中的抗體結(jié)合,從而使該抗體間接地標(biāo)記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量就代表特異性抗體的量。例如欲測(cè)人對(duì)某種疾病的抗體,可用酶標(biāo)羊抗人IgG抗體。

  (4)加底物顯色:顏色深度代表標(biāo)本中受檢抗體的量。

  elisa間接法法只要更換不同的固相抗原,可以用一種酶標(biāo)抗抗體檢測(cè)各種與抗原相應(yīng)的抗體。

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