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Elisa檢測試劑盒的顯色液A和B有什么作用?

閱讀:7129      發(fā)布時間:2021-5-7
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  Elisa檢測試劑盒具有敏感性高、特異性強(qiáng)、操作簡單等優(yōu)點(diǎn),被廣泛應(yīng)用于各種抗原和抗體的測定,為輔助臨床診斷與生物科研起到了積的作用。
  
  Elisa檢測試劑盒檢測中顯色液A和B有什么作用?
  
  酶聯(lián)免疫診斷試劑盒的底物A就是顯色劑A(含過氧化氫)為供氫體(DH2),底物B就是顯色劑B(含TMB),用于顯色。另外,常用的底物還有:
  
  AP的底物,常用的為對-硝基苯磷酸脂(PNP),其反應(yīng)物為黃色的對硝基酚,測讀波長為405nm2)GOD的底物,為葡萄糖,供氫體為對硝基藍(lán)四氮唑,反應(yīng)產(chǎn)物為不溶性的藍(lán)色沉淀。
  
  什么是TMB?TMB即四甲基聯(lián)苯胺是種脂溶性較強(qiáng)的基團(tuán),因此容易進(jìn)入細(xì)胞與細(xì)胞器中的HRP反應(yīng),且由于這種高度的脂溶性,使其易形成多聚體,在HRP活性部位產(chǎn)生粗大的、深蘭色沉淀物,這使得TMB成為組化實(shí)驗(yàn)中的種很好的發(fā)色團(tuán)。同時反應(yīng)產(chǎn)物的沉淀,使得HRP的活性部位更加暴露,利于酶氧化反應(yīng)進(jìn)行。
  
  TMB的反應(yīng)產(chǎn)物為深藍(lán)色,利于光鏡觀察,且反應(yīng)產(chǎn)物越聚越大,常超出單個細(xì)胞器的范圍(而DAB則被限制在其內(nèi)),故TMB反應(yīng)的檢測閾較低。
  
  由于上述優(yōu)點(diǎn),目TMB常用于光鏡及超微結(jié)構(gòu)水平的HRP及HRP-WGA神經(jīng)投射的研究。需要注意的是:Elisa檢測試劑盒顯色液中的A液和B液應(yīng)在2h內(nèi)新鮮配制。另外,TMB是種較強(qiáng)的皮膚刺激劑,并有致癌的潛在可能,故使用時應(yīng)帶手套及在通風(fēng)條件下操作。

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