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如何從脂肪組織中提取總蛋白?

時間:2024/6/3閱讀:637
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    從培養(yǎng)的細胞和組織中提取總蛋白是實驗室非常常見的實驗步驟,從大多數(shù)類型的細胞和組織中提取總蛋白比較容易,但是從脂肪組織中提取高質量和高濃度蛋白質是非常困難的。脂肪組織有白色和棕色脂肪兩種類型,被稱為白色脂肪組織(WAT)和棕色脂肪組織(BAT)。脂肪組織中含有許多脂滴,蛋白質含量小于細胞總數(shù)的 2%。低蛋白含量使得從脂肪中分離高濃度蛋白挑戰(zhàn)性。以下是幾種從脂肪組織中提取蛋白的方法:
 
A.RIPA 緩沖液提取法:
   脂肪組織通過含有表面活性劑的緩沖液(例如 RIPA 緩沖液)勻漿,離心后,收集脂肪層下的液體組分為蛋白質,這種方法是相對簡單的,但是蛋白質的產(chǎn)量非常低,因為表面活性劑經(jīng)常導致蛋白質形成微小顆粒導致蛋白丟失。
 
B. 有機溶劑萃取 TCA 沉淀法:
    有以下三種方法:1)脂肪組織通過蔗糖密度梯度離心,丙酮中加入三***(TCA)-20℃ 過夜沉淀蛋白。2)脂肪組織用有機溶劑提取液裂解(CHCl3和甲醇的混合物),也如上用 TCA 沉淀。3)脂肪組織用有機溶劑提取液(TEF 和CHCl3勻漿,通過離心將水相和CHCl3相分離,將其上的水相和交界面去除,并通過離心蒸發(fā)干燥。以上三種方法的共同問題是操作繁瑣,產(chǎn)量低。
 
C. 離心管柱提取法:
    這種方法利用了一種新的蛋白質提取技術,脂肪組織通過無表面活性劑的緩沖液勻漿,水油乳狀液通過簡單的冷凍后,離心使其通過特殊的離心管柱(有孔徑,表面性質被處理過的)提取。離心管柱的作用是快速,干凈的從油相中分離出水相蛋白。Invent Biotechnologies Inc 公司利用技術生產(chǎn)的這種脂肪蛋白提取試劑盒可以從脂肪組織中提取全部的總蛋白,產(chǎn)量遠遠高于其他方法。

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