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單抗和多抗的優(yōu)缺點

時間:2024/6/3閱讀:644
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一、單克隆抗體
1.優(yōu)點:
①雜交瘤制得后,就成為了恒定的再生源,所有批次都將相同–對確保實驗步驟和結(jié)果的一致性和標(biāo)準(zhǔn)化非常有幫助。
②單克隆抗體通常在切片和細(xì)胞染色造成的背景較低。因為它們以更強特異性檢測一個靶表位,所以不太可能與其它蛋白質(zhì)發(fā)生交叉反應(yīng)。
③由于具有特異性,單克隆抗體非常適于用作分析測定中的一抗,或者用于檢測組織中的抗原,并且通常所產(chǎn)生的背景染色顯著低于多克隆抗體。
④與多克隆抗體相比,單克隆抗體的同質(zhì)性非常高。如果實驗條件保持不變,單克隆抗體的各實驗結(jié)果重現(xiàn)性很高。
⑤單克隆抗體的特異性能使其在混合物中和抗原地結(jié)合。
2.不足之處:
①可產(chǎn)生大量特異性抗體,但是可能特異性過強。
②經(jīng)過抗原的化學(xué)處理后比多克隆抗體更易于丟失表位。這可通過使用同一抗原的兩個或多個單克隆抗體進(jìn)行補償。
3.客觀事實:
①僅檢測抗原上的一個表位。
②它們僅由一個抗體亞型組成。在需要二抗進(jìn)行檢測時,應(yīng)針對正確的亞類選擇抗體。
4.抗體制備:
①需要高技術(shù)。
②需要先培訓(xùn)才能使用技術(shù)。
③制備雜交瘤耗時長。


二、多克隆抗體
1.優(yōu)點:
①多克隆抗體可有助于放大低表達(dá)水平的靶蛋白信號,因為靶蛋白可在多個表位上結(jié)合不止一個抗體分子。但是這會給定量實驗造成不利影響,因為結(jié)果將變得不準(zhǔn)確。
②由于能識別多個表位,多克隆抗體可在IP/ChIP中得到更好的結(jié)果。
③比單克隆抗體更能容許抗原中的微小變化。
④它們會識別出與免疫原蛋白質(zhì)具有高同源性的蛋白質(zhì),或者從非免疫原物種的組織樣品中篩選靶蛋白,例如當(dāng)未測試物種中的抗原性質(zhì)未知時,有時會使用多克隆抗體。這也使得檢測免疫原序列以確定是否有任何交叉反應(yīng)性非常重要。
⑤多克隆抗體通常是檢測變性蛋白質(zhì)的選擇。
⑥多表位通常可提供更為有力的檢測。
⑦多克隆抗體不適用于探測抗原的特定結(jié)構(gòu)域,因為抗血清通常可識別多個結(jié)構(gòu)域。
2.不足之處:
①易于產(chǎn)生批次間差異。
②產(chǎn)生大量非特異性抗體,有時可能在某些應(yīng)用中產(chǎn)生背景信號。
③多表位使得檢測免疫原序列以確定是否有任何交叉反應(yīng)性非常重要。
3.客觀事實:
①識別任一抗原上的多個表位。獲得的血清將包含不同親和力抗體的異質(zhì)復(fù)合體混合物。
②多克隆抗體主要由 IgG 亞類組成。
③肽免疫原通常用于產(chǎn)生靶向wei一表位的多克隆抗體,特別適合高同源性的蛋白家族。
4.抗體制備:
①制備所需技術(shù)和技能不高。
②制備時間短。
③多克隆抗體不適用于探測抗原的特定結(jié)構(gòu)域,因為多克隆抗血清通常可識別多個結(jié)構(gòu)

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