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膠體電泳法檢定蛋白質
閱讀：810 發(fā)布時間：2010-7-1電泳的高解析?使其成為生化技術中zui有效?的一門分析?器，以下簡?說明各種電泳的形式及其應用。
a. ?連續(xù)膠體電泳 （disc-PAGE） 是以原態(tài)蛋白質進?電泳，一般用作純?檢定或活性分析，SDS-膠體電泳 （SDS-PAGE） 則用為次體分子?的測定，梯?（gradient） 電泳則可輔助原態(tài)蛋白質分子?的決定。 結合SDS及梯?兩種特性的SDS-梯?膠體電泳，其解析?zui高。
b. 電泳形式 早期使用圓柱?膠體，演變成直?式的平板膠片 （16×18 cm），zui后改成迷你電泳膠片 （8×10 cm），電泳時間只約一小時，而其解析??變。現(xiàn)在柱?膠體電泳只用在等電焦集法，以進?二次元電泳；而大型平板電泳則多用在制備式電泳，一般電泳大多以迷你膠片進?的。
c. 膠體材質 的種類很多，但用在蛋白質者則以聚丙烯酰胺 （polyacrylamide） 為主；聚丙烯酰胺電泳是蛋白質應用zui廣的電泳分析方式。也有少數(shù)使用洋菜膠體 （agarose gel），多用在測定pI較廣的異構酶酶群。
d. 泳動?： 在pH 8.8 的電泳條件下，大部分pI 小于8.8 的分子均能往正極泳動；蛋白質的泳動?與所帶電荷成正比，而與其分子?成反比；?分子?一樣，但形?越?規(guī)則，或體積越松散者，泳動?越小。
e. 聚丙烯酰胺電泳 雖然分有原態(tài)的disc-及變性的SDS-PAGE 兩種，但兩者除?SDS-PAGE 在整個系統(tǒng)含有0.1% SDS 的外，其余*相同，且其鑄膠及電泳方法均屬大同小異。
f. 原態(tài)disc-PAGE 中的樣本蛋白質，因電泳系統(tǒng)中?含界面活性劑SDS，其活性多能保持，可以在膠體上做活性染色。 ?目標酶沒有方?的活性染色法，則可把膠體一片一片切下，做每一片膠體的活性測定。