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再生式序列復(fù)制反應(yīng)直接擴(kuò)增RNA靶序列
閱讀：821 發(fā)布時(shí)間：2012-6-30再生式序列復(fù)制反應(yīng)（self-sustained sequence replication reaction，3SR）是一項(xiàng)與PCR類似的新技術(shù)。它利用3種酶（AMV逆轉(zhuǎn)錄酶、RNA酶H及T7RNA聚合酶）的活性，進(jìn)行體外mRNA的擴(kuò)增。
所用的引物A與待檢的RNA3’端互補(bǔ)，并在引物的5’端含一個(gè)T7RNA聚合酶的識(shí)別結(jié)合位點(diǎn)；引物B則與引物A引導(dǎo)合成的cDNA的3’端互補(bǔ)。3SR的基本原理是，在AMV逆轉(zhuǎn)錄酶的作用下，以靶mRNA為模板，在引物A的引導(dǎo)下合成cDNA*鏈，形成RNA／DNA雜交體。而RNA酶H則可破壞RNA／DNA雜交體中的模板RNA。
AMV逆轉(zhuǎn)錄酶同時(shí)還具有DNA聚合酶活性，此時(shí)以cDNA*鏈為模板，在引物B的引導(dǎo)下合成cDNA第二鏈，形成雙鏈cDNA。此cDNA的*鏈上帶有T7RNA聚合酶啟動(dòng)子，在T7RNA聚合酶的作用下，即可合成與靶mRNA序列相同的RNA。新合成的RNA又可作為模板進(jìn)入下一次循環(huán)，如此，以RNA／DNA和雙鏈cDNA為中間體，通過逆轉(zhuǎn)錄和轉(zhuǎn)錄反應(yīng)的反復(fù)循環(huán)將靶mRNA擴(kuò)增。
3SR反應(yīng)產(chǎn)物以10的指數(shù)遞增，其擴(kuò)增效率比PCR高，而反應(yīng)時(shí)間明顯縮短，僅需15min。3SR是能將RNA靶序列直接擴(kuò)增出來的一項(xiàng)十分有效的新技術(shù)。