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IL-8的誘生與IL—8的免疫學(xué)檢測
閱讀：525 發(fā)布時間：2012-5-12IL-8由單核／巨噬細胞、成纖維細胞、上皮細胞和內(nèi)皮細胞等多種細胞產(chǎn)生，其主要生物活性是激活中性粒細胞。
多用人外周血或臍帶血單個核細胞，也可用體外培養(yǎng)傳代細胞系。LPS、PHA、ConA、IL-i、TNFa均是較理想的刺激劑。
1．常規(guī)分離PBMC，洗滌后，調(diào)整細胞濃度為5X106／mL。
2．加入終濃度為1ug／mL的LPS及10mg／mL的PI-IA，混勻后置37％，5％C02溫箱中培養(yǎng)48h，離心收集上清。
3．用HCl將培養(yǎng)上清調(diào)為酸性（pI-14．0），經(jīng)SephadexG-75柱分離，收集活性組分即為IL-8粗制品。
免疫學(xué)檢測法
1．雙抗體夾心法ELISA 同常規(guī)夾心法ELISA。
2．原位免疫細胞化學(xué)測定法 該法用于測定細胞漿內(nèi)IL-8含量。首先將待測細胞（如皮膚成纖維細胞）培養(yǎng)于平皿中的蓋玻片上，加入適當?shù)拇碳ㄈ鏘OOU／mL的hlL-1。），共孵育一定時間；將載玻片取出，空氣干燥后在丙酮中固定10min；將蓋玻片粘附于載玻片上，加入適當濃度的抗IL-8McAb，室溫反應(yīng)30rain，沖洗后加入酶標的第二抗體，沖洗后加底物顯色，顯微鏡下觀察。