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淋巴母細胞增殖法檢測IL—12
閱讀：404 發布時間：2012-4-21本法利用IL-12促進PHA激活的人淋巴母細胞增殖來測定IL-12含量，這是目前定量測定IL-12的方法，操作亦較簡單，但因IL-2、IL-4和IL-7亦可促進PHA激活的淋巴母細胞增殖，故此法不宜用于可能含多種細胞因子標本的測定。
1．用*培養液稀釋人或鼠IL-12標準品分別至2ng／mL和4nz／mL，然后進行5倍系列稀釋共3個稀釋度。
2．系列稀釋待檢標本，使其IL-12濃度大致處于2—20ng／mL范圍。
3．向96孔板加PHA激活的人淋巴母細胞50uL／孔（終濃度2X104／mL）。
4．加40ul待檢標本和各稀釋度IL-12標準品，設3個復孔，zui后3孔加*培養液50ul作為對照（無II．-12），培養24h。
5．加3H-TdR，繼續培養18h，收獲細胞，計算IL-12含量。
[附]：PHA激活的人淋巴母細胞制備：
①取正常供者外周血，常規方法分離PBMC；
②在5mL*培養液中懸浮PBMC，臺盼藍染色計數活細胞；
③接種于75cm2培養瓶，20mL液體中的細胞數為1X107，加20／uL PHA混勻后，水平培養3d；
④加20mL培養液，搖動培養瓶使細胞?昆勻，轉移20mL內容物至另一培養瓶；
⑤加人rh-IL-2至終濃度為50U／mL，孵育24h；
⑥將細胞從培養瓶轉移至15mL離心管，室溫下1 500r／min，離心5min，除去上清；
⑦用培養液同上離心洗3次，所得細胞即為淋巴母細胞。