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聚乙二醇(PEG)沉淀補體消耗試驗
閱讀：836 發布時間：2012-2-8用低濃度PEG將IC沉淀，沉淀物中加入補體，以溶血反應檢測補體消耗率。
(一)試劑
1．熱聚合人ISC：制備方法同PEG沉淀試驗。
2．硼酸緩沖鹽水(朋S) 含硼酸0．1mol/L，硼砂25mmol/L，NaCl 75mmol/L，調整為pH8.4
3．PEG 用BBS將PEG配成12.5%和2.5%。
4．0.2mol/L EDTA-Na2用1mol/L NaOH調整為pH7．2。
5．5XVB保存液 NaCl 85，0g，巴比妥5．75g，巴比妥鈉3．75g，加蒸餾水約1 500ral，加熱溶解后補加蒸餾水至2000mL。
6．GVB2+5×VB保存液400mL，0．03mol/LCaCl210mL，0．1mol/L MgCl2 10mL，2％明膠lOOmL，補加蒸餾水至2000mL，pH7．5。
7．致敏綿羊紅細胞(SRBC) 2％SRBC懸液加等量1：1 000溶血素，37t水浴l0min，用GVB2+將致敏SRBC配成1．5×108/mL。
8．人補體與健康人對照血清 選用總補體溶血活性正常的健康人血清數份混合，作為補體來源。自3名健康人各取血清50mL，各按lmLl份分裝，—70℃凍存，每次取3份血清作為對照。
(二)操作步驟
1．待測血清0．3mL，加0．2mol/L EDTA-Na2和BBS各50uL，充分混勻后加入12。5％PEG 0．1mL，混勻，置4℃ 90rain。
2．4℃ 1 700r／rain離心10min，棄上清，沉淀物用2．5％PEG洗1次，用玻璃棒攪拌，再于4℃ 1 700r/min離心15min，棄上清，管口余水用濾紙吸除。
3．加入37℃ 30min預溫的GV鏟’30uL，待沉淀溶解后，加入混合人補體10uL(用微量加樣器準確加入)。混勻，置37℃，使補體與IC充分反應。
4．加入1．5X108／mL致敏SRBCl．0mL，37℃水浴振蕩60rain。取出后立即加人4℃冷生理鹽水6．5mL，離心，吸取上清液于414mn波長測吸光度。
5．每批試驗以熱聚合人IgG 5、10、25、50、lOOug/mL制備標準曲線。
根據標準曲線換算成相當于熱聚合人IgG的ug/mL。