化工儀器網
技術文章
酶聯免疫吸附試驗（ELlSA）診斷禽流感
閱讀：1042 發布時間：2011-7-12酶聯免疫吸附試驗技術（enzyme inmmnosorbent assay，ELISA），以免疫過氧化物酶技術為基礎，創立于1971年。它的基本原理是將抗原或抗體吸附到固相載體的表面，并仍能保持其免疫活性；抗原或抗體與酶所形成的結合物各自保持其免疫學活性和酶的催化活性；結合物與相應的抗體或抗原反應后，免疫復合物上的酶在遇到相應的底物時，可催化底物水解、氧化或還原，從而產生有色物質，可用肉眼觀察。由于反應顏色的深淺與相應抗體或抗原的量成正比，故可對抗體或抗原進行定量測定。1974年Jennings等首先用ELISA對注射流感病毒所產生的抗體消長規律進行了檢測，Lanbre認為ELlSA的敏感性遠高于HI和補體結合反應。Meulemans（1987）對ELISA、AGP、HI檢測AIV抗體進行了比較研究發現，AGP和ELISA一樣均能檢測型特異性抗原（抗體）,但其敏感性遠低于ELISA，HI適用于亞型的檢測，其敏感性也不如ELISA。
李海燕等用桿狀病毒表達的AIV病毒核蛋白制備抗原，建立了以桿狀病毒系統表達的AIV核蛋白為抗原的禽流感間接（重組核蛋白）ELISA診斷技術（rNPELISA）。實驗證明，rNP-ELISA與全病毒間接ELISA（AIV-ELISA），AGP及HI的符合率分別為99．9％、97．1％和98．8％，并能100％檢出AGP陽性及疑似HI陽性的血清樣品，這證明了rNP-ELISA是檢測A型AIV血清特異性抗體的一種特異、敏感、微量、快捷和經濟的血清學診斷技術。
1993年，Skodihall建立了快速診斷的DAS-ELISA，大大縮短了診斷時間，用混合纖維素酯膜或硝酸纖維素膜代替微量反應板，可保留ELlSA的特異性、敏感性，其結果又不需要特殊儀器分析，可肉眼判定。ELlSA法已成為AIV流行病學普查及早期快速診的zui有效和*的方法。
ELISA方法的敏感性和特異性與抗原的純度直接相關，1984年Abraham等報道了抗原快速提純法，所需時間與常規的抗原提純法相比縮短10倍，ELISA成為Al流行病學普查及早期快速診斷的zui有效和*的方法。